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作为食源性活性肽,大豆肽具有各种功能活性,例如抗氧化,降血压和抗炎。食源性活性肽在满足癌症患者的身体功能和营养需求的同时干预癌细胞生长增殖。原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,最常见的类型是肝细胞癌(HCC),目前关于癌症患者食用食源性活性肽的研究报道尚少。本文以免疫活性大豆寡肽QRPR(Gln-Arg-Pro-Arg)、HCQRPR(His-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg)为研究对象,选用Hep G2人肝癌细胞为模型细胞,从细胞凋亡角度出发,从分子水平探讨大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)抑制Hep G2细胞增殖的机制;并从结构与功效的关系入手,探索大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)在Hep G2细胞增殖过程中发挥的作用。本论文主要研究内容与结果如下:(1)进行大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对Hep G2细胞活力影响的评价,选用Hep G2细胞作为模型细胞。MTS试验结果表明大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对Hep G2细胞增殖有抑制作用,在相同处理浓度和时间条件下,大豆寡肽QRPR、HCQRPR联合处理Hep G2细胞比两者单独处理的抑制率高,可显著抑制Hep G2细胞增殖(p<0.05),呈浓度以及时间依赖性,两者联合使用最佳处理条件为处理浓度800μM,处理时间72h。qPCR结果显示,随着大豆寡肽QRPR和HCQRPR联合处理浓度和时间的增加,PTEN基因的表达量显著增加,Hep G2细胞G1期细胞增多(p<0.05),迟滞了Hep G2细胞从G1期至S期,Hep G2的细胞周期受到了影响,从而抑制Hep G2细胞增殖。(2)通过体外细胞培养实验,探讨了大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)对Hep G2细胞凋亡的作用及其机制。透射电镜结果显示,经大豆寡肽QRPR和HCQRPR联合处理后,Hep G2细胞的超微结构发生变化,其内部有凋亡小体的产生。Annexin V-FITC/PI双染色试验结果显示大豆寡肽QRPR、HCQRPR可以诱导Hep G2细胞凋亡,且两者联合处理比单独处理凋亡率更高,呈浓度及时间依赖性,抑制率最高为54.06±1.38%。这提示我们大豆寡肽QRPR和HCQRPR可诱导Hep G2细胞凋亡。进一步试验对大豆寡肽QRPR和HCQRPR诱导凋亡的机制进行研究,通过酶联免疫法对TNF-α表达量进行检测、以及qPCR和Western-blot对caspase-8和caspase-3表达量进行检测。上述试验结果表明,大豆寡肽QRPR和HCQRPR作用于Hep G2细胞后,促使TNF-α与TNFRI结合,TNF-α的表达量显著降低(p<0.05),从而激活caspase-8以及caspase-3表达,说明大豆寡肽QRPR和HCQRPR可通过TNF细胞通路诱导Hep G2细胞凋亡。说明大豆寡肽QRPR和HCQRPR抑制Hep G2细胞增殖与其诱导凋亡有关。(3)采用圆二色谱、傅里叶红外光谱确定大豆寡肽QRPR、HCQRPR为无规则卷曲结构,通过ANTHEPROT、Discovery Studio软件预测得到大豆寡肽QRPR和HCQRPR都为带正电荷的、两性多肽及其空间结构的分子构象图,探究了大豆寡肽(QRPR、HCQRPR)的构效关系。综上所述,本文研究了大豆寡肽QRPR、HCQRPR对肝癌细胞Hep G2细胞凋亡的作用及机制,为大豆活性肽在功能食品开发及癌症患者饮食中的应用提供了理论依据和科学依据,为进一步提高大豆制品利用率、提高大豆产品的附加值提供了新思路。