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进行了大量的虫生真菌菌种筛选工作,将62份不同来源的害虫样品进行平板初筛后,得到80余株几丁质酶产生菌.对初筛菌种分别进行最适pH值、最适作用温度、产孢量和毒力的实验,得到32株希望菌株.从结果可知,这些菌株有的耐高温,有的耐酸,也有的同时耐高温和耐酸,寄主谱较广,因而建立的是一个小型但比较有特色的菌种库.应用He-Ne激光对球孢白僵菌Beauveria bassiana 75A进行辐照处理.研究了不同剂量激光辐照对菌体生长的影响,0.48mW·cm<-2>、15min的剂量利于菌体的诱变.金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一种重要的昆虫寄生真菌.几丁质酶合成的最佳碳源和诱导物为几丁质.在一定范围内增加培养基中几丁质浓度,葡萄糖浓度,微量元素盐浓度和碳氮比都能提高几丁质酶活.胆汁酸和吐温80作为表面活性剂能显著提高几丁质酶活.通过摇瓶试验得到优化培养基和培养条件.根据优化条件在摇瓶和3.7L发酵罐中分别进行产酶试验,实验结果表明,几丁质酶活分别达到0.231 IU.mL<-1>和0.273 IU.mL<-1>.从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae),它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl Sepharose6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶分子量为61.5KD,而经质谱分析为57.14KD.最适反应温度为55℃,最适反应pH值为6.0,酶的等电点pI为4.02,其N末端序列为VIGPAAPL,用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2％.水解几丁质的K<,m>为14.5 μ mol/L.该酶在45℃,pH3.0-9.5较为稳定.Zn<2+>、Ca<2+>、Ba<2+>和Mn<2+>离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg<2+>、Co<2+>和Fe<2+>离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大,丝氨酸可能是酶活力的必需基团.金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)M-6菌株对多种作物害虫有良好的防效.本文研究了M-6菌株产生的拮抗毒素蛋白的纯化及其部分特性.该菌株的发酵液经过酸沉淀和有机溶剂抽提,所得的拮抗物粗提液对热稳定,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K、碱性蛋白酶部分敏感,对氯仿部分敏感,其作用的活性pH范围低至4,高至12以上,比较耐碱性.粗提液经Phenyl-Sepharose CL-4B柱层析、DEAE-Sephacel柱层析和FPLC的Superdex75HR 10/30柱层析等步骤后,拮抗物质得到纯化,硅胶薄层层析显色为单点.该物质在275nm处有吸收峰,对蛋白酶有一定耐受性,茚三酮反应呈阴性,但酸水解后,茚三酮反应呈阳性,双缩脲反应也呈阳性.氨基酸组分分析结果表明,该物质由谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苏氨酸、脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸和一种异常氨基酸组成.推测该物质为一种环状多肽,命名为MP-1.