南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)最早于2001年在中国广东省阳江市发现。SRBSDV是呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的成员,其引起的南方水稻黑条矮缩病可导致水稻生产的严重减产。该病毒通过白背飞虱(WBPH,Sogatella furcifera Horvath,Hemiptera:Delphacidae)以持久增殖型方式进行传播。在过去的几年内,借助白背飞虱的迁移,SRBSDV已经迅速蔓延至中国南部、越南北部、日本和泰国,成为亚洲东南部和东部最重要的水稻病毒病之一。白背飞虱可借助风力进行长距离迁移,因此其在亚洲大部分国家均有分布,包括中国、巴基斯坦、日本、韩国、沙特阿拉伯、泰国、印度、印度尼西亚、斐济、孟加拉国和塞舌尔。带毒白背飞虱的迁移分散可导致SRBSDV的二次侵染,进而造成南方水稻黑条矮缩病的爆发。病毒通过与介体昆虫之间的特异性互作来完成其有效的传播,这种互作可以帮助病毒在昆虫体内各个组织间运输,并能克服昆虫各种免疫反应。目前针对病毒在介体内侵染、移动和复制过程的分子机理和涉及的互作蛋白的研究较少,因此,为解析介体昆虫的传毒机制则必须明确和鉴定与病毒互作的介体昆虫蛋白。在本研究中,我们利用了酵母双杂交技术,以SRBSDV的外壳蛋白P10为诱饵,筛选了介体白背飞虱的cDNA文库,共获得了130个互作的白背飞虱蛋白。根据基因注释(GO)对这130种互作蛋白进行了分类,其中依据分子功能可分为12类,依据生物学过程可分为9类,依据细胞组分可分为8类。同时对这些互作蛋白的的最佳匹配物种进行了分析,其中12.3%的蛋白与内华达古白蚁(Zootermopsis nevadensis)同源,9.2%与赤拟谷盗(Tribolium castanetum)同源,4.6%可比对上白背飞虱已知序列,4.6%与致倦库蚊(Culex quinquefasciatu)同源,3.5%分别与柑橘木虱(Diaphorina citri)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、欧洲熊蜂(Bombus terrestris)和苜蓿切叶蜂(Megachile rotundata)同源。根据互作蛋白的分子功能、参与的生物过程以及blast的比对结果,选出28种候选蛋白进行了酵母双杂交再次共转验证,β-半乳糖苷酶实验显示25种蛋白与SRBSDV-P10存在互作,其中15种蛋白存在显著互作。随后对这15种蛋白的编码序列进行扩增,利用5’RACE试剂盒以酵母双杂筛选到的序列为基础获得了5种蛋白的全长ORF,分别为囊泡相关膜蛋白7(VAMP7)、囊泡运输蛋白(Vtila)、生长激素诱导的跨膜蛋白(Ghitm)、初生多肽相关复合体alpha亚基和ATP合成酶脂质结合蛋白(线粒体)。进一步利用pull-down技术对这5种蛋白与SRBSDVP10的互作进行了验证,结果显示其中3种蛋白(VAMP7、Vtila和Ghitm)与SRBSDV-P10存在互作。我们进一步通过RT-qPCR对pull-down验证的互作蛋白VAMP7,Vti1a和Ghitm进行了转录水平分析。结果显示VAMP7和Ghitm在雄性成虫中表达量高,Vti1a在雌性成虫阶段含量丰富。比较分析VAMP7,Vti1a和Ghitm在白背飞虱6种不同组织(血淋巴、唾液腺、肠、马氏管、脂肪体和卵巢)转录水平,结果显示VAMP7主要在肠内转录,Vti1a和Ghitm在马氏管内转录水平最高。在不同发育阶段和不同组织转录水平的差异表明这些蛋白在不同阶段和组织发挥不同的功能。研究结果表明白背飞虱的这3种蛋白质与SRBSDV-P10存在互作,推测这些蛋白参与到病毒传播和在昆虫不同组织、细胞和器官内移动的复杂过程中。