研究背景:骨质疏松症（osteoporosis）是由多种原因引起的以骨密度和骨质量下降,骨微结构破坏为特征的全身性骨骼疾病,易使患者发生髋部、脊柱和其他部位的骨折。作为全世界的一个主要公共卫生问题,骨质疏松症随着世界人口的老龄化而日益普遍。由于人口的老龄化,其带来的的社会和经济负担正在稳步增加。临床上用于治疗骨质疏松症的药物主要有抗骨吸收类药物如双膦酸盐类、促骨形成类药物如甲状旁腺素PTH（1-34）及双重作用类药物如雷奈酸锶。然而,每种药物都有其局限性,如一定的副作用或价格昂贵。例如,作为一线药物的双膦酸盐,有引起颌骨坏死、严重肌肉骨骼疼痛、食道癌和肾衰竭的副作用。此外,这些药物对年龄相关的、激素相关的和其他类型的骨质疏松症的疗效较差。因此,开发安全有效的治疗骨质疏松症的药物势在必行。天然植物提取物作为一种潜在的预防和治疗人类疾病的药物,因其取材广泛、副作用较小的特点近年来受到了越来越多的关注。原阿片碱是一种异喹啉生物碱,作为一种植物单体,它的众多的药理作用已被人们所发掘,如:抗炎、抗血小板聚集、抗癌、镇痛、血管扩张、抗胆碱酯酶、抗成瘾、抗惊厥、抗病原体、抗氧化、保肝、神经保护、细胞毒性和抗增殖活性作用,但是原阿片碱在骨重建及破骨细胞中的药理作用仍没有被人探索。目的:利用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。利用该模型探索原阿片碱在体外对破骨细胞生成的可能作用及具体机制,同时为因破骨细胞过度分化所导致的骨质疏松等疾病提供新的可能的治疗思路,为植物单体原阿片碱的进一步的体内外研究提供一定的依据及参考。方法:利用破骨细胞特异性染色TRAP染色实验鉴定RANKL（50ng/ml）诱导RAW264.7细胞形成的破骨细胞,并且评价不同浓度原阿片碱（0,5,10,20μM）对RANKL（50ng/ml）诱导的破骨细胞生成的作用。在指定的时间点向含有RANKL（50ng/ml）的RAW264.7细胞中加入原阿片碱（20μM）,通过TRAP染色探究原阿片碱发挥对破骨细胞分化抑制作用的具体时间点。通过CCK-8实验来探究不同浓度的原阿片碱（0,5,10,20μM）对RAW264.7细胞活力的影响。采用罗丹明-鬼笔环肽染色实验来探究不同浓度原阿片碱（0,5,10,20μM）对RANKL（50ng/ml）诱导的破骨细胞F-肌动蛋白环的作用。利用Real-time PCR实验从基因方面分析不同浓度原阿片碱（0,5,10,20μM）对破骨细胞形成至关重要的转录因子NFATc1和c-Fos及破骨细胞特异性基因TRAP,Cathepsin K（Cts K）,ATP6V0d2和MMP-9的作用。利用蛋白印迹试验分析不同浓度原阿片碱（0,5,10,20μM）对关键转录因子NFATc1和cFos及破骨细胞特异性标志物TRAP,Cathepsin K（Cts K）,ATP6V0d2和MMP-9蛋白表达的作用;分析原阿片碱（20μM）对破骨细胞生成过程中关键信号分子NF-κB（IκB、p65）及MAPKs（JNK、ERK、p38）蛋白表达的作用。所有的实验单独重复三次,所有实验结果均以平均值±标准差的形式表示。所获得的实验数据用Graph Pad Prism（第8版）软件进行单因素方差分析和Student’s t检验,*p＜0.05被认为具有统计学意义。结果:成功搭建RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的模型。原阿片碱以剂量依赖性（0,5,10,20μM）的方式抑制RANKL诱导的破骨细胞的生成且对RAW264.7细胞的活力无影响,且其主要在破骨细胞生成的早期阶段发挥抑制作用。原阿片碱也以剂量依赖性的方式抑制RANKL诱导的破骨细胞F-肌动蛋白环的形成。从基因层面及蛋白质表达层面,原阿片碱以剂量依赖性的方式抑制了RANKL诱导的破骨细胞关键转录因子NFATc1及c-Fos和破骨细胞特异性标志物TRAP,Cathepsin K（Cts K）,ATP6V0d2和MMP-9的表达。最后,原阿片碱在不同的时间点抑制了破骨细胞生成过程中关键信号分子IκB、NF-κB p65、JNK、ERK、p38的磷酸化。结论:我们的研究表明,作为延胡索的主要成分之一,原阿片碱通过抑制NF-κB和MAPKs信号通路以及破骨细胞特异性转录因子NFATc1和c-Fos,抑制了破骨细胞特异性标志物TRAP、Cts K、MMP-9和ATP6V0d2的表达,最终抑制了RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化。因此,原阿片碱作为破骨细胞分化的抑制剂,对于由破骨细胞过度活跃引起的疾病,如骨质疏松症等,具有潜在的治疗前景。