重症肌无力（MG）是一典型的器官特异性自身免疫性疾病，是自身免疫耐受失败的结果。CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（Tregs）是调控和维持机体自身免疫耐受的主要免疫细胞，其中在数量和功能上起扮演主要角色的是胸腺来源的自然Tregs（nTregs）。Tregs与效应T细胞（Teffs）在机体内处于相互依存的关系，且维持着一定的平衡状态，自身免疫性疾病的发生是与这种平衡被先天或后天的因素所破坏有关。近年来，关于Tregs在MG发病中的作用备受国内外学者关注，但研究得出的结论并非完全一致，可能涉及的因素包括选取不同的Tregs相关分子、年龄偏差等。因此，我们认为在全面系统评估MG患者体内Tregs和Teffs的变化时需考虑到这些混杂因素的干扰。此外，我们也想了解那些常规治疗MG患者的免疫抑制剂如糖皮质激素（GC）和丙种球蛋白（Ig）是如何发挥免疫调节作用的。本研究分为三个部分：一、检测MG患者外周血中代表Tregs的相关分子，探索它们与患者病情严重程度的相关性以及GC等免疫抑制剂对它们影响。二、了解Tregs、naǐve T细胞和Th17细胞在MG患者胸腺组织中的表达情况。三、观察Th₁/Th₂/Th₁₇等Th亚群在MG患者外周血中的变化以及GC等免疫抑制剂对它们的影响。一、MG患者外周血中Tregs相关分子的变化以及强的松等免疫抑制剂对它们的影响CD4⁺FOXP3⁺T细胞、 CD4⁺CD25highT细胞、 CD4⁺CD25⁺CD127-T细胞和CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺T细胞均被不同的研究者看做是人源Tregs的代表，在本次研究中我们一一考察它们在MG患者外周血中的变化，并探索它们与患者病情严重程度的相关性以及GC等免疫抑制剂对它们影响。本实验我们采用流式细胞仪的六色荧光分析技术。为了解Tregs对患者病情的影响，将65例MG患者分为活动期患者57例和缓解期患者8例。为探讨GC、Ig等免疫抑制剂对Tregs和Th亚群的影响，我们又将活动期的57例MG患者分为未治疗组17例、GC治疗组29例和IVIg治疗组11例。健康对照组90例。患者组平均年龄是39.0±13.2岁，健康对照组平均年龄34.5±9.0岁。患者组性别比是11:8（男：女），健康对照组是3:2（男：女）。结果发现外周血中CD4⁺CD25⁺CD127-T细胞的比例和绝对数无论在活动状态的患者还是处于缓解期的患者与健康对照者相比均无明显差异。我们对CD4⁺CD25highT细胞的检测结果显示活动期患者CD4⁺CD25highT细胞比例显著低于健康对照者，与缓解期患者相比较时却无差异。CD4⁺FOXP3⁺T细胞在未治疗组和GC治疗组与健康对照组比较时均未见差异，但IVIg治疗组的百分比显著升高。CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺T细胞无论在百分比和绝对数上活动期患者显著地低于缓解期患者和健康对照者，后两者之间则无差异。在应用GC和Ig等免疫抑制剂后多数患者肌无力症状得到了不同程度的改善，伴随的是患者外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺T细胞比例的升高，它们之间呈显著的负相关。二、Tregs、naǐve T细胞和Th17细胞在MG患者胸腺组织中的变化为探讨胸腺在MG发病中的价值，我们进行了胸腺标本的免疫组化分析。为防止年龄等混杂因素对结果的影响，我们还同时设立了多组对照，包括健康对照组和MG（-）的胸腺瘤组。健康对照来自因胸部外伤或心血管畸形接受心脏手术的患者，他们既往均未罹患自身免疫性疾病，也未服用相关药物。MG患者组39例，平均年龄40.92±14.4岁，男女性别比是10:29；健康对照组14例，平均年龄14.43±6.28岁，男女性别比是3:11；MG（-）的胸腺瘤患者组29例，平均年龄45.24±12.70岁，男女性别比是8:21。CD25在胸腺中的表达强烈提示是Tregs，而FOXP3的表达又是决定胸腺产生的Tregs是否成熟及能否发挥抑制功能的关键，因此，我们同时检测了CD25和FOXP3在胸腺中的表达情况作为胸腺Tregs的代表结果显示MG患者胸腺中CD25阳性细胞和FOXP3阳性细胞的数量和表达强度显著低于健康对照组，但两者存在着年龄的偏差，因此差异可能是由年龄造成的。因此，我们又将年龄与MG患者匹配的MG（-）的胸腺瘤患者与之相比较，结果发现无论在数量还是强度上两者均无明显差异。与Tregs相对应的Teffs前体naiveT细胞是在胸腺中发育并输出的，我们的免疫组化结果同时显示MG（+）胸腺瘤患者胸腺中CD4⁺细胞和CD8+细胞较MG（-）胸腺瘤患者和健康对照者显著增多。我们用流式的方法检测了几例新鲜胸腺标本中Th17细胞的表达，结果发现无论是MG（+）的胸腺瘤患者还是MG（-）胸腺瘤患者胸腺中均未发现Th17细胞，同样在健康对照者胸腺中也未发现。三、Th₁/Th₂/Th₁₇等Th细胞亚群在MG患者外周血中的变化及免疫抑制剂对它们的影响Th细胞的不同亚群在MG发病中扮演什么样的角色是我们此次研究的目标之一。我们将新鲜提取的外周血单个核细胞（PBMNC）在加入适当浓度的刺激剂后放置CO2孵育箱培养4⁶个小时。然后进行流式抗体标记。考虑到CD4⁺T细胞在增殖过程中可能会出现包膜内陷CD4分子难以检测到，我们采用CD3和CD8抗体反相标记CD4⁺T细胞。Th亚群的代表性细胞因子均为胞内表达，故在标记表面分子后须固定、破膜。Th亚群的流式检测结果显示患者外周血中的Th₁/Th₂/Th₁₇无论在比例和绝对数上均与健康对照者无明显差异，GC和Ig等免疫抑制剂对它们也无明显的影响。与此相对应的是，MG患者血浆中分别代表不同Th亚群的炎症细胞因子与健康对照者相比较也无明显不同。总之：根据我们的研究结果可以得出这样的几个结论：1)在免疫稳态中具有最强的免疫调节功能也是nTregs中一个最稳定的亚群CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺T细胞在MG患者外周循环中显著减少，可能的原因并不是胸腺发育的缺陷。另外，我们在研究中发现患者外周循环中CD4⁺FOXP3⁺T细胞百分比和绝对数与健康对照者比较均没有明显减少。2)患者外周血中的三个Th亚群无论是绝对数还是百分比与健康对照者相比较时均未发现明显变化。3)大部分胸腺瘤或胸腺增生的患者接受治疗性胸腺切除（Tx）手术后肌无力症状会改善，可能的原因在于患者胸腺增生活跃，生成和输出的naǐve T细胞增多。4) GC和Ig仍然是目前治疗MG的最常用药物，我们的研究结果证实它们的治疗作用是与其提升Tregs比例有关。