目的 研究骨髓基质干细胞（marrow stromal cells,MSCs）与生物衍生骨复合构建组织工程骨,修复山羊胫骨的大段骨—骨膜缺损,以探讨其修复大段负重骨缺损的可行性;比较骨髓基质干细胞与生物衍生骨分别在体内、体外复合所构建的组织工程骨修复山羊胫骨的大段骨-骨膜缺损的能力,以探讨修复大段负重骨缺损最佳途径,比较体外构建与体内构建的组织工程骨修复山羊胫骨大段骨-骨膜缺损的血管化进程以及血管化与成骨的关系,了解不同组织工程骨修复长管状负重骨缺损的血管化情况,为进一步组织工程骨的临床实验提供依据。 方法 1.取健康成人尸体胫骨,彻底清除软组织,切除干骺端松质骨及皮质骨,制成3.0×1.0×1.0cm³的柱状骨块,每骨块均同时包含部分松质骨及皮质骨,经脱细胞、脱脂、脱蛋白、去抗原处理后冻干制成生物衍生骨,分装密封,用环氧乙烷消毒灭菌备用。 2.取健康山羊在无菌条件下穿刺抽取红骨髓,梯度离心、分离;接种于含胎牛血清的DMEM培养基中,在37℃、5%CO₂和饱和湿度条件下培养。待培养的细胞相互汇合达到90%生长面积时用0.25%胰蛋白酶消化传代培养。待细胞传至3代时,培养基内加入地塞米松、维生素、β-甘油磷酸纳诱导3天后标记、消化、计数备用。