目的:肾间质纤维化是导致肾功能衰竭的主要决定因素。肾间质纤维化的发生发展是一个复杂的过程,涉及多种细胞因子及细胞内信号转导通路。肾小管间质病变及其严重程度往往决定着肾脏疾病的预后。因此,探讨肾小管间质纤维化的发病机制及防治措施具有重要的临床意义。转化生长因子β1(Transforming growth factor TGF-β1)在多种纤维化疾病中均发挥强效的致纤维化作用。TGF-β1通过促进足细胞、内皮细胞、小管上皮细胞及间质成纤维细胞产生大量的基质成份,以及肾小管上皮细胞转分化,导致肾小球硬化及小管间质纤维化,最终发展成为终末期肾衰竭。活化素受体样激酶(Activin Receptor-like Kinase)家族,属于丝氨酸/苏氨酸激酶,特别是ALK5对于活化的TGF-β1发挥其生物学活性至关重要。提示ALK5与慢性肾间质纤维化的发生发展密切相关。ALK5受体能够活化其下游的Smad及P38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase P38 MAPK)信号通路,将TGF-β1信号传导至细胞内,促进细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)沉积。肝细胞生长素(Hepatocytegrowth factor HGF)作为一种多效性因子,对于肾损伤后肾小管的修复与再生至关重要。HGF通过抑制TGF-β1的表达;抑制成纤维细胞活化及细胞外基质的过度生成;加速细胞外基质降解;阻断肾小管上皮—肌成纤维细胞转分化;抑制细胞凋亡;促进细胞增殖等方面,发挥肾脏保护作用。注射用促肝细胞生长素(Hepatocyte Growth-promoting Factors forⅠnjection)是从动物肝脏中提取的小分子多肽类活性物质,目前主要应用于重症肝炎和早期肝硬化的临床治疗。迄今为止,国内外尚未见促肝细胞生长素对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral occlusion,UUO)大鼠模型肾组织HGF、TGF-β1、ALK5表达影响的研究。本实验以UUO大鼠模型为研究对象,观察肾脏组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测HGF、TGF-β1、ALK5的表达情况,同时应用促肝细胞生长素进行干预,探讨肾间质纤维化中HGF、TGF-β1、ALK5的表达变化及促肝细胞生长素对其影响,为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。方法:选择清洁级健康雄性Wistar大鼠54只,体重(200±10)克,随机分为三组:假手术组(正常对照组,A组),单侧输尿管结扎组(UUO组,B组),促肝细胞生长素干预组(C组),每组各18只。每组又因于术后第3、7、14天分批处死而分为N3、N7、N14组,每组各6只。将B、C组大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后,行左侧耻骨上切口,沿左肾下极寻找到左侧输尿管,在中上1/3处用4号线上下结扎两处,然后从中剪断输尿管,以防逆行性感染。A组除不结扎和剪断输尿管外,其他手术过程同前。C组大鼠以促肝细胞生长素0.5mg/(Kg·d)腹腔注射,1次/日;A和B组大鼠用等容积生理盐水腹腔注射,1次/日,三组均于术前一天开始注射至术后第3天、第7天和第14天,实验期间自由进食水。术后第3天、7天、14天各组随机选取6只大鼠分三批颈椎离断处死,后立即取出大鼠左肾组织,分别用苏木素伊红(HE)、Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,应用图像分析系统进行半定量分析。采用免疫组织化学方法测定肾问质HGF、TGF-β1、ALK5的表达,结果应用图像分析系统进行半定量分析。实验结果均以均数±标准差((?)±s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用t检验,应用SPSS11.5统计分析软件对实验数据进行统计学处理,P＜0.05为有统计学意义。结果:光镜下观察,HE及Masson染色A组未见异常。HE染色可见B组及C组各时相点大鼠肾脏肾小球均无明显变化。B组术后3天肾小管扩张不明显,可见肾间质炎症细胞局灶浸润,肾间质宽度增加;第7天肾小管扩张明显,上皮细胞变性、水肿、甚至坏死,肾间质大量炎症细胞浸润,间质宽度明显增加,偶见萎缩肾小管;第14天上述病变加重,可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,小管基底膜不同程度断裂,皮质及外髓萎缩的肾小管较多,间质中大量淋巴单核细胞浸润,纤维化较明显。Masson染色可见B组术后3天肾小管扩张,肾间质宽度增加,胶原纤维增加,染色加深;此后,病变逐渐加重。C组与B组平行相比肾小管间质病变程度明显减轻,肾间质相对面积明显减少(P＜0.05)。三组间比较均有统计学差异(P＜0.05)。免疫组织化学结果显示:TGF-β1在A组在肾小管间质、肾小球微量表达。在B组各时相点TGF-β1的表达随时间呈进行性升高,且随梗阻时间延长表达逐渐上调。B组组间及与A组同时相点相比均有统计学差异(P＜0.05)。C组术后第3天、第7天、第14天TGF-β1的表达均显著低于同时期B组的表达(P＜0.05),但仍高于同期A组(P＜0.05)。ALK5在A组各时期均几乎无表达。在B组主要表达于肾小管上皮细胞,肾间质有少量表达,随着梗阻时间的延长,肾间质纤维化程度的加重,ALK5的表达逐渐增多,有统计学意义(P＜0.05)。C组与B组同时相点相比ALK5的表达均减少,组间、组内均有统计学差异(P＜0.05)。HGF在A组各时期均几乎无表达。在B组主要表达于肾小管上皮细胞,于第3天表达最高,第7天稍有回落,第14天表达最弱,但均高于同期A组(P＜0.05)。与同期B组相比,C组术后第3天、第7天、第14天HGF的表达均显著高于同时期B组的表达(P＜0.05)。结论:在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质中TGF-β1、ALK5的表达明显升高,且随着梗阻时间的延长,其表达数量也逐渐增加,出现肾间质纤维化;而HGF的表达在早期迅速增加,后期随着梗阻时间的延长,其表达数量也逐渐降低,出现肾间质纤维化。促肝细胞生长素能有效抑制肾间质中TGF-β1、ALK5的过度表达,促进肾间质中HGF表达,从而能够改善UUO大鼠肾脏组织形态学变化,减轻肾小管扩张及肾间质单核-淋巴细胞浸润,并减少肾小管间质胶原的沉积,延缓肾间质纤维化。