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“三拗汤”是《太平惠民和剂局方》记载的经方,由麻黄、苦杏仁和生甘草组成,主治感冒风邪、鼻塞声重、头痛目眩、咳嗽多痰等证。“米槁方剂”以甘草等为主要原料,在体外细胞水平有广谱抑制呼吸道病毒的作用,体内实验也证明其有抗小鼠流感病毒性肺炎和抑制小鼠体内流感病毒增殖的作用,并可延长流感病毒感染小鼠的存活时间。
为了对这两个中药方剂进行二次开发,研制其有效部位为原料的中药新药“三拗汤滴丸” 和“米槁软胶囊”,本论文借助现代提取分离纯化手段,对其中的一味主药甘草进行了其有效部位的制备工艺研究。主要包括以下几方面的研究内容:
通过含量测定的方法学考察,建立了高效液相色谱法测定甘草中有效成分甘草酸、甘草苷含量的方法和紫外分光光度法测定甘草总黄酮含量的方法,并以其用于甘草有效部位工艺研究中甘草药材、甘草提取物等原料或工艺中间产物中甘草酸、甘草苷和甘草总黄酮的含量测定。结果表明,所建立的各含测方法可行,重现性、稳定性好。
采用以甘草酸和甘草总黄酮含量为评价指标,对甘草有效部位的提取及分离纯化工艺进行全面系统的研究,并对其影响因素的考察参数进行系统的筛选,确定了最佳工艺参数,其最佳纯化工艺为:取药液上柱后,依次用A溶液50 mL, B溶液100 mL,蒸馏水150 mL通过树脂柱 ,接着用40%乙醇50 mL除杂,用80%乙醇250mL洗脱有效部位后回收乙醇,水浴蒸干得提取物。通过两批中试放大试验,并对提取物进行含量测定,结果两批提取物的甘草酸和甘草总黄酮总含量均大于50%,转移率均分别大于50%,结果表明该工艺重现性较好,适合大生产。
实验结果证实,采用本工艺可制得纯度较高的甘草有效部位,为进一步进行“三拗汤滴丸”和“米槁软胶囊”的制剂学、药效学、毒理学和临床研究打下了良好的基础。