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本研究的主要目的是构建融合表达人白细胞介素-2(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体。首先设计合成一段150bp的接头序列，将其插入载体pUC57的多克隆位点中，称为pUC-MCS。酶切质粒pUC-MCS和pRevTet-On后，分别回收目的片段进行连接，将连接子转化E.coli DH5a，筛选连接正确的质粒，命名为pRev-MCS。对质粒pRev-MCS和pEGFP-C1进行酶切，构建重组质粒pRevEGFP-C1。同时对质粒pBV220-IL-2和pEGFP-C1进行酶切连接，重组为过渡质粒pEGFP-C1-IL-2。再分别酶切质粒pRevEGFP-C1和pEGFP-C1-IL-2，连接重组为可融合表达IL-2和EGFP的逆转录病毒载体pRevEGFP-C1-IL-2，经酶切等检测分析证明，构建的载体pRevEGFP-C1-IL-2完全符合设计方案。利用脂质体Lipofectin将构建好的质粒转入包装细胞PT67中，经G418选择性培养液筛选后得到具有G418抗性的PT67细胞克隆。将抗性克隆进行扩大培养，得到能够产生逆转录病毒载体的包装细胞PT67／C1-IL-2。取PT67／C1-IL-2细胞的培养上清，经不同比例稀释后感染NIH3T3细胞进行滴定，测得重组逆转录病毒载体的滴度为7×10~4 CFU／ml。进一步取PT67／C1-IL-2细胞的培养上清，感染NIH3T3细胞后，在荧光显微镜下观察到绿色荧光。利用hIL-2 ELISA试剂盒检测，经感染的NIH3T3细胞分泌的IL-2浓度为17.12pg／ml。通过淋巴细胞增殖试验测定感染后的