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艾滋病已经在全球范围流行了30余年,迄今尚无彻底清除病毒感染并治愈AIDS的方法。治疗性艾滋病疫苗(Therapeutic HIV vaccine)的主要目标在于通过重建或激活被感染者自身的抗HIV免疫功能,增强感染者对HIV的特异性免疫反应的强度,降低病毒载量,延缓HIV感染者发展成为AIDS患者,实现对患者的功能性治愈,认为是一种具有潜在希望的AIDS疗法。因HIV疫苗缺乏有效的动物模型,而SIV与HIV-1同源性高且感染宿主之后的病理过程及免疫反应类似,SIV/猴模型可以有效地评价HIV疫苗效果;HIV疫苗中,血清型5型腺病毒载体疫苗研究较多,因血清型5型腺病毒(Ad5)人群感染率高,其他血清型腺病毒载体或嵌合病毒发展起来。艾滋病疫苗添加佐剂也是近年来,HIV疫苗研发的热点。Ad5F35为将Ad5纤毛蛋白改造后的嵌合病毒。本研究使用AdEasyTM腺病毒包装系统构建了表达SIV gag基因的rAd5F35-SIV gag疫苗并对其进行纯化,经鉴定重组腺病毒rAd5F35-SIV gag中含有SIV gag基因,且能有效的表达Gag蛋白,进行了疫苗的小鼠药效学研究。Ad5F35-SIV gag疫苗以不同的剂量免疫小鼠,采用ELISPOT法检测免疫小鼠体内gag特异性细胞免疫反应,结果显示各剂量组小鼠均能诱导gag特异性细胞免疫应答,其中1×108 TCID50/只剂量组小鼠体内gag特异性细胞免疫应答最强。本课题组前期的研究中提出的使用多载体HIV疫苗进行重复和序贯免疫的策略证实,在接受多载体疫苗序贯免疫的动物体内能诱导持续时间较长、反应强度较高的HIV特异性免疫反应。因此,本研究将构建的Ad5F35-SIV gag疫苗,联合课题组前期构建的pVR-SIV gag、Ad5-SIV gag疫苗在小鼠体内进行了序贯和重复免疫,结果显示,DNA疫苗初免,免疫Ad5F35载体疫苗,再免疫Ad5载体疫苗的策略激起的Gag特异性的细胞免疫反应更强。本研究构建了表达IL-7、IL-21基因的质粒pVR-IL7、pVR-IL21,以DNA疫苗(pVR-HIVenv)单独或添加CpG ODN、Poly(I:C)对小鼠进行初免,以腺病毒载体疫苗(Ad5-HIVenv)单独或添加IL-7、IL-21基因进行加强免疫,末次免疫后两周分别采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测免疫小鼠诱导的特异性细胞免疫应答和体液免疫应答,采用CCK-8法检测免疫小鼠淋巴细胞增殖反应的强度。ELISPOT结果显示Ad5-HIVenv疫苗联合pVR-IL7佐剂及CpG ODN组的细胞免疫水平高于Ad5-HIVenv疫苗联合pVR-IL7佐剂组,并且显著高于疫苗单独免疫组;CCK-8结果也显示,疫苗联合pVR-IL7基因佐剂及CpG ODN佐剂组小鼠的特异性的淋巴细胞增殖反应强度高于疫苗联合pVR-IL7佐剂组小鼠,而疫苗联合pVR-IL21佐剂与疫苗单独免疫组相比没有增强小鼠特异性的淋巴细胞增殖反应强度。所获结果,对艾滋病疫苗添加佐剂的研究具有一定的参考价值。