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目的:子宫内膜癌(Endometrial Carcinoma,EC)是女性常见的恶性肿瘤之一,合并肥胖、糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)、高血压皆是高危险族群,近几年发病率呈逐年上升,并且发病人群越来越年轻化。临床上,主要的治疗方法是手术切除,但治疗后复发率和死亡率仍较高、预后差。临床实践中发现,EC患者中DM是普遍存在的伴发疾病,长期高血糖状态增加EC的发生和发展危险。LncRNA(long non-coding RNA)是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA,在多种肿瘤中异常表达,通过多种机制调控肿瘤的发生发展,被证实为恶性肿瘤形成的重要的基因表达调控器。长链非编码RNA生长阻滞特异性转录物5(LncRNA Growth arrest-specific transcript 5,LncRNA GAS5)在乳腺癌、胃癌、宫颈癌等肿瘤中低表达,过表达GAS5可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期,目前关于GAS5在DM合并EC中的研究并不多,因此本研究探讨GAS5在DM促进EC发展过程中的作用及机制。方法:1、根据生物信息学预测影响EC生存期的指标,收集并统计天津中心妇产医院2017年5月-2018年2月新发的EC患者的病历资料,将所有EC患者依据是否合并DM分为单纯EC组和DM合并EC组,对两组患者的临床病理特点比较,采用qRT-PCR检测两组癌组织中GAS5和miR-222-3p的表达,同时分析其与临床病理特点的关系和各指标之间的关系。2、体外培养EC细胞株HEC-1A和Ishikawa,采用不同浓度的葡萄糖(5.5mM、15mM、20mM、25mM),干预EC细胞48h,利用qRT-PCR检测GAS5和miR-222-3p的表达变化,构建GAS5过表达载体,和miR-222-3p抑制剂,应用CCK-8实验、克隆形成及Transwell侵袭实验检测细胞增殖、克隆形成及侵袭作用。3、在不同高糖浓度下,采用qRT-PCR检测P27的表达,利用核质分离试剂盒检测GAS5在Ishikawa细胞中的亚细胞定位,使用双荧光素酶实验验证GAS5和miR-222-3p及miR-222-3p和P27(CDKN1B)的关系;过表达GAS5和上调miR-222-3p共同转染Ishikawa细胞后,检测miR-222-3p和P27表达的变化,使用Western blot检测P27蛋白的表达变化。结果:1、利用生物信息学,挑选出与EC相关的LncRNA GAS5进行研究,与高表达GAS5的EC患者相比,低表达GAS5的EC患者远期预后差,生存期缩短(P=0.072)。临床资料分析,DM合并EC组的患者初诊时,肿瘤FIGO分期和组织分级都高于单纯EC组,且更容易发生淋巴结转移(P<0.05)。在EC组织中GAS5呈低表达,且下降程度与是否合并DM、肿瘤组织分级、FIGO分期和淋巴结转移有关。与单纯EC组相比,DM合并EC组的癌组织中GAS5的表达量更低(P<0.05);与癌旁正常子宫内膜相比,EC合并与不合并DM患者miR-222-3p的表达均升高,且DM合并EC组的患者miR-222-3p的表达升高更多,其上升程度与肿瘤FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05),两组中GAS5与miR-222-3p之间均呈负相关关系(P<0.05)。2、与正常子宫内膜细胞相比,HEC-1A及Ishikawa细胞中,GAS5的表达水平明显下调,而miR-222-3p的表达水平明显上调(P<0.01)。随着高糖浓度的增加,GAS5的表达呈下降趋势,而miR-222-3p的表达呈上升趋势(P<0.05)。过表达GAS5质粒转染进EC细胞系内,并稳定表达;体外细胞生物学行为研究发现,高糖(25mM)能够促进EC细胞增殖、增强克隆形成和侵袭能力,而过表达GAS5或者抑制miR-222-3p后都可逆转高糖诱导的EC细胞的增殖、克隆形成及侵袭(P<0.01)。3、在HEC-1A及Ishikawa细胞中,P27的表达水平明显下调(P<0.01),随着高糖浓度的增加,P27的表达呈下降趋势(P<0.05)。在Ishikawa细胞中GAS5在细胞浆的表达量高于细胞核;双荧光素酶实验结果提示GAS5与miR-222-3p存在结合位点,两者能直接调控,而P27(CDKN1B)可以与miR-222-3p结合。与对照组相比,过表达GAS5后,miR-222-3p的表达量下降,P27的表达水平上升(P<0.01);上调miR-222-3p后,P27 mRNA和蛋白水平均下调;而过表达GAS5同时上调miR-222-3p后,P27 mRNA和蛋白水平出现了明显减少(P<0.01)。结论:1、DM可能会通过影响EC的分期分级、淋巴结转移,促进肿瘤的进展、影响患者的预后,LncRNA GAS5可能作为EC患者的一个预后指标。2、GAS5和miR-222-3p可能在DM合并EC中起着重要作用,过表达GAS5或抑制miR-222-3p后,可逆转高糖诱导的EC细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。3、高糖经LncRNA GAS5/miR-222-3p通过调控P27影响EC细胞增殖和侵袭。