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雌性生殖干细胞(famale germline stem cells,FGSCs)是具有自我更新和分化潜能的生殖系干细胞。自噬参与调控生殖细胞的存活与死亡,但尚未见有关自噬对FGSCs的影响及相关分子机制的报道。苯并硼唑类化合物(Benzoxaboroles)目前被广泛应用于抗炎、抗菌和抗癌等,适用于实验研究和临床应用。在细胞功能研究方面,benzoxaboroles能抑制人类卵巢癌skov-3细胞的生长,推测其可能诱导细胞发生自噬或凋亡。化合物89(C89)是一种苯并硼唑类化合物,本研究旨在明确C89对FGSCs发育的影响及其诱导FGSCs自噬的相关分子机制。对几种benzoxaboroles进行筛选,发现C89对FGSCs的生长有抑制作用。为了确定C89对FGSCs发育的影响,用不同浓度C89(0.5,1,2μM)处理FGSCs后,用血球板细胞计数、细胞活力检测(Cell Counting Kit-8,CCK8)和5-乙炔基-2-脱氧尿苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EdU)掺入等方法检测发现FGSCs数量、活力和增殖力均显著降低(P<0.01)。RT-PCR检测发现C89处理组没有分化相关标记基因Stra8和Sycp3的表达。流式细胞凋亡检测表明C89处理组和对照组之间的凋亡率没有显著差异。利用western blot检测自噬相关标志蛋白微管相关蛋白轻链3 beta II(LC3BII)和sequestosome-1(SQSTM1)的表达量,结果表明C89处理组中LC3BII的表达量显著升高(P<0.01),SQSTM1的表达量显著降低(P<0.001)。这说明在相同情况下,C89对FGSCs的凋亡和分化无影响,但可诱导FGSCs自噬。进一步探究C89诱导FGSCs自噬的分子机制,我们采用RNA sequencing(RNA-seq)技术对C89处理组与对照组之间的转录组差异进行了比较,筛选出了937个上调和1046个下调的差异表达mRNAs,以及4个与自噬相关的差异表达mRNAs,Bcl2、Atg7、Trp53和Rubcn。以上4个mRNAs的qRT-PCR检测结果与RNA-seq测序结果一致。此外,我们还发现C89诱导FGSCs自噬可能与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路有关。Western blot检测p-PI3K和p-Akt的表达量发现,p-PI3K和p-Akt的表达水平在C89处理组中显著降低(P<0.05),这表明C89可抑制PI3K/Akt信号通路的活性。之后,我们还检测了PI3K抑制剂LY294002对FGSCs自噬的诱导效果,结果表明C89和LY294002都通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导FGSCs自噬且具有协同作用。综上所述,本研究表明C89可通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导FGSCs自噬,从而降低FGSCs的数量、活力和增殖力。PI3K/Akt信号通路可作为调节FGSCs自噬的靶点,而C89有可能成为PI3K/Akt信号通路的新型抑制剂。