论文部分内容阅读
葛根素是从中药葛根中提取出的一种化学物质,临床研究发现,葛根素具有治疗骨质疏松症的作用。实验表明,葛根素治疗骨质疏松症的其中之一机理,为其促进成骨细胞的增殖和分化作用相关,但是其具体的分子机制尚不明确,需要通过进一步研究来进行探讨。目的：通过实验来探讨葛根素治疗骨质疏松症的分子机制。研究方法：取新生24小时的SD大鼠头盖骨,使用0.1%Ⅱ型胶原酶消化法分离出成骨细胞,取第四代成骨细胞进行实验,使用碱性磷酸酶染色法以及形态学法鉴定成骨细胞,碱性磷酸酶比色法检测葛根素对促成骨细胞分化能力的影响,通过MTT法检测不同浓度、不同时间葛根素药液对成骨细胞增殖能力的影响,按照MTT法检测的最佳葛根素药物浓度和作用时间,作用成骨细胞,Realtime PCR法检测其OPG/RANKL基因转录,Western Blot法,检测其OPG/RANKL蛋白量的表达,最后通过统计学分析OPG/RANKL表达量的比值变化。结果：①通过碱性磷酸酶染色法,可见培养细胞胞浆内有许多细小棕色颗粒的存在鉴定为成骨细胞；②MTT结果显示,葛根素药物浓度为1mg/ml,0. lmg/ml和0.01mg/ml时,作用成骨细胞时间为24小时后,对照相同浓度12小时和48小时处理组,MTT值显示最明显(1mg/ml:53.28±0.42,0.1mg/ml:66.13±0.55,0.01mg/ml:54.81±0.74),与对照组比较具有统计学差异(P<0.05)；③碱性磷酸酶比色法结果证实,葛根素处理液浓度lmg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml作用成骨细胞24小时后,相比较相同浓度12小时和48小时组,碱性磷酸酶表达效果最好(1mg/ml:0.521±0.08,0.1mg/ml:0.612±0.03,0.01mg/ml:0.706±0.06),与对照组比较具有统计学差异(P<0.05)；④RealtimePCR法检测了成骨细胞OPG/RANKL的基因转录水平,1mg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml三个葛根素处理组,作用成骨细胞24小时后,OPG/RANKL基因转录比值为,1mg/ml:0.582+0.02,0.1mg/ml:0.823±0.03,0.01mg/ml:0.801±0.06,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05)；⑤Western Blot法检测了成骨细胞内OPG/RANKL蛋白表达水平,1mg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml三个葛根素处理组,作用成骨细胞24小时后,OPG/RANKL的比值为,1mg/ml:0.77±0.24,0.1mg/ml:0.79±0.32,0.01mg/ml:0.76±0.85,与对照组的比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论：葛根素可以通过影响OPG/RANKL基因的表达,进而促进成骨细胞的增殖和分化。