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目的
体外分离培养大鼠骨髓单个核细胞,用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)加以诱导,纯化内皮祖细胞,对内皮祖细胞的生长特性进行鉴定。
方法
冲洗大鼠长骨骨髓腔,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,将收集的单个核细胞分别置于DMEM基本培养液(DMEM,10%FBS)和DMEM诱导培养液(DMEM,10%FBS,bFGF10ug/L)中分组培养。观察细胞在成纤维细胞生长因子诱导体系下生长情况并与术诱导组比较,埘培养细胞进行免疫细胞化学检测。于培养3、7、1 4天采用流式细胞仪检测CD133<+>/Flk-l<+>双标记阳性细胞百分率。
结果
贴壁细胞生长呈现团簇样生长、线样排列特殊形念。免疫细胞化学检测贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、Ⅷ因子(vWF)呈阳性表达。流式细胞仪结果显示各时间点诱导组CD133<+>/Flk-1<+>双标记阳性细胞百分率明显高于未诱导组(P<0.01)。
结论
密度梯度离心法在bFGF培养体系下可以获得较高纯度的EPCs,该细胞具有内皮细胞的特性,经过休外诱导可以分化为内皮细胞。