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本研究根据GenBank中鹅细小病毒VP3基因序列,应用Oligo软件设计一对引物,液相PCR扩增出了预期长度为441bp的片段;另外在扩增片段范围内,应用Oligo软件设计一段34bp的寡核苷酸探针,5’端用地高辛标记,建立了能特异从免疫小鼠和雏鹅组织石蜡切片中检测出pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗的原位杂交和间接原位PCR方法。将pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗分别以200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫BALB/C小鼠和30日龄雏鹅,并设置生理盐水和空白载体为对照组,免疫后不同时间分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肠、脑和免疫部位(皮肤或肌肉)和雏鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、盲肠、直肠、胰腺、脑和免疫部位(皮肤或肌肉)等组织;通过建立的原位杂交和间接原位PCR方法检测pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗在小鼠和雏鹅体内的动态分布规律和组织定位特点。结果表明:1.建立的原位杂交和间接原位PCR方法特异性强、灵敏度高、定位准确,斑点杂交结果显示,所设计的寡核苷酸探针可检测约13pg的同源DNA。2.应用建立的原位杂交检测pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗在小鼠和雏鹅体内的分布规律:pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗能快速而广泛分布于小鼠和雏鹅各个组织,各剂量肌肉注射和基因枪轰击后1h即可在除脑各组织中检测到pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗,免疫后3h小鼠和雏鹅脑组织呈阳性;pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗在各组织中持续时间存在差异,肌注组在肌肉组织中存留时间最长,为105d,其次为肝脏63d,而基因枪轰击组在肝脏组织中存留时间最长,雏鹅组达133d,而小鼠组为63d,脾脏和心脏次之,分别为63d和49d,脑组织中持续时间最短,小鼠仅持续7d,而雏鹅大剂量组仅持续49d,雏鹅各肠段持续时间无明显差异。3.pcDNA-GPV-VP3基因疫苗信号强弱和持续时间存在的总体规律为:6μg组＞3μg组＞1μg组,200μg组＞100μg组＞50μg组,说明基因疫苗免疫剂量和分布规律有一定的正相关性。4.肌肉注射和基因枪轰击都是pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗的良好免疫途径,但基因枪轰击基因疫苗剂量更少,然而在被免疫的小鼠和雏鹅体内也能快速而广泛的分布,在雏鹅法氏囊和哈德氏腺中持续时间反而比肌肉注射途径更长,信号也更强,说明基因枪轰击优于肌肉注射免疫途径。5.原位杂交检测pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗在动物组织中的定位规律:原位杂交结果显示,pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗于免疫1h后各组织阳性信号位于细胞核和细胞浆,而免疫3h后主要位于细胞核,少数细胞浆呈阳性,随着时间的推移,各组织阳性信号逐渐减弱;阳性信号主要分布在肝细胞和枯否氏细胞,脾脏弥散性分布有阳性细胞,肠黏膜上皮细胞、杯状细胞和肠腺细胞,肺泡上皮细胞,肾脏肾小管,胸腺髓质和皮质,法氏囊髓质;各个组织信号强度存在差异,总的看来,肝脏、心脏、脾脏和注射部位肌肉组织信号较强,肾脏和肠组织次之,脑组织信号最弱,雏鹅各肠段分布规律和信号强弱无明显差异。6.间接原位PCR比原位杂交灵敏度高,检测到的pcDNA-GPV-SC-VP3基因疫苗在免疫小鼠和雏鹅体内持续时间更长,且检测到的杂交信号也更强。