论文部分内容阅读
目的观察经方抵当汤及其蕴含的“泻热化瘀通络”治法对糖尿病心肌病模型大鼠的心肌炎症反应、心肌纤维化病变以及心肌微血管病变三个方面病变以及NF-κB信号通路的影响,以探讨抵当汤对糖尿病心肌病变的影响及可能的作用机制。方法将135只体质量为250±20g健康雄性SD大鼠适应性喂养1周后,随机将其分为两大组,其中10只作为正常组,125只复制糖尿病(DM)造模。将待造模动物禁食不禁水24 h,单次左下腹腔按55mg/kg剂量注射链脲佐菌素(STZ)溶液,最终共有120只大鼠造模成功。再将120只造模成功的大鼠随机分为:模型组、吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)组、抵当汤高剂量(DDG)组、抵当汤中剂量(DDZ)组、抵当汤低剂量(DDD)组以及DDG+PDTC(DP)组,每组20只。给药方法:正常组及模型组按照5 ml/(kg·d)剂量灌胃生理盐水,中药组分别给予DDG组、DDZ组、DDD组分别按1.08/(kg·d)、0.72 g/(kg·d)、0.54 g/(kg·d)剂量,PDTC组按0.15g/(kg·d)剂量,DP组按1.08 g/(kg·d)抵当汤+0.15g/(kg·d)PDTC剂量灌胃药物。于每日早上8点灌药一次,持续8周。8周后,将所有大鼠禁食12小时后麻醉、腹主动脉采血、迅速摘取心脏,进行相应的检测。1抵当汤对由NF-κB通路激活导致的DCM大鼠心肌炎症反应的影响:(1)Elisa法测定DCM大鼠心肌组织白介素-1β(IL-1β)表达;(2)免疫荧光检测心肌组织NF-кB和Ik B。2抵当汤对NF-κB通路激活导致的DCM大鼠心肌纤维化的影响:(1)Masson三色染色观察心肌的形态学变化;(2)免疫组织化学法检测MMP9和TIMP1蛋白表达。3抵当汤对DCM大鼠心肌微血管病变的影响:(1)透射电镜观察大鼠心肌超微结构的改变;(2)放射免疫检测心肌组织匀浆TNF-α的表达;(3)免疫组织化学法检测内皮素(ET-1)受体蛋白的表达。结果实验过程中共有38只大鼠死亡,各用药组一般情况较模型组不同程度改善,DDG组最好;降血糖方面,各治疗组血糖虽有下降趋势,但无统计学意义(p>0.05)。1(1)Elisa法测定DCM大鼠心肌组织IL-1β表达:与正常组相比,模型组IL-1β表达程度明显升高(p<0.01);各治疗组与模型组比较,IL-1β均有不同程度降低(p<0.05);组间比较发现,DDG组表达水平与正常组最接近。(2)免疫荧光检测心肌组织NF-кB和Ik B:模型组的NF-кB、Ik B阳性细胞数较正常组均有增加(p<0.01);与模型组比较,各治疗组NF-кB、Ik B阳性细胞数则减少(p<0.05);各组之间比较,DP组NF-кB阳性细胞数最少,DDG组Ik B阳性细胞数最少。2(1)Masson三色染色观察心肌的形态学变化:正常组心肌纤维排列整齐;模型组心肌纤维走行紊乱不清,胶原成分大量沉积,纤维增生明显;各治疗组则见被染成蓝色的范围较模型组不同程度地减少,心肌纤维化减轻;组间比较发现,DDG组心肌纤维化改善最为显著。(2)免疫组织化学法检测MMP9和TIMP1蛋白表达:与正常组比较,模型组MMP9蛋白的表达水平显著升高,而TIMP1表达则下降明显(p<0.01);与模型组比较,各治疗组MMP9蛋白表达均降低,其表达水平的由低到高的顺序为:DP组<DDG组<PDTC组<DDZ组<DDD组;各治疗组TIMP1蛋白表达与模型组比较均升高,表达水平排序:DP组>DDG组>PDTC组>DDZ组>DDD组。3(1)透射电镜下大鼠心肌超微结构的改变:模型组心肌细胞肌丝排列紊乱、稀疏,大部分肌丝断裂扭曲,局部溶解、丧失,明暗带不明显,部分线粒体肿胀明显,嵴变宽、断裂、甚至消失,毛细血管基膜增厚,核膜水肿明显;两个治疗组与正常组的大鼠心肌细胞结构较相近,心肌细胞肌丝排列较整齐,线粒体轻度肿胀,偶见空泡变,核膜水肿不明显,心肌细胞超微结构的损伤减轻并接近正常;其中,中药组对心肌超微结构的改善最明显。(2)放射免疫检测心肌组织匀浆TNF-α的结果:与正常组比较,模型组TNF-α明显升高(p<0.01);与模型组比较,各治疗组均不同程度下降,且差异显著(p<0.05);各组之间比较,DDG组TNF-α和正常组的含量最为接近。(3)免疫组织化学法检测ET-1受体蛋白的结果:模型组该蛋白表达较正常组均增高(p<0.01);各治疗组与模型组比较,ET-1受体蛋白含量则不同程度降低(p<0.05);其中DP组该受体蛋白含量最低,与正常组最接近。结论1具有“泻热化瘀通络”作用的经方抵当汤能够显著改善DCM模型大鼠的一般状况(包括精神状态、尾部皮损程度、饮食饮水等)。2 DM心肌病变中炎症反应、纤维化病变以及微血管病变符合“瘀热阻络”病机,经方抵当汤及“泻热化瘀通络”治法对炎症反应、心肌纤维化及微血管病变三方面的病理改变具有干预作用。3具有“泻热化瘀通络”作用的经方抵当汤可以有效地抑制NF-κB信号通路的激活,改善DM模型大鼠的心肌病变,可能是抵当汤防治DCM进展的作用机制。