猪瘟病毒是对养猪业危害极大的病原之一，对猪瘟抗体水平进行正确监测是防治猪瘟的重要前提，本研究围绕检测猪瘟抗体水平试剂盒的研制开展了如下实验： 1．设计两对引物扩增E2蛋白的A／D抗原区和B／C抗原区基因，并将扩增出的373bp和261bp目的片段分别插入毕赤酵母表达载体p PICZ_αC中，构建成重组质粒pPICZ_α-AD和p PICZ_α-BC，并筛选得到含A／D基因的高拷贝转化子5株，含B／C基因的高拷贝转化子3株，经甲醇诱导表达、SDS—PAGE、间接ELISA和Western blot试验，结果表明：两个基因片段都能被分泌表达，且都含有具有良好反应原性，但A／D区基因表达产物E2AD蛋白结合抗体的能力比B／C区基因表达产物E2BC蛋白高。 2．研究了培养条件与表达产量的关系，确定高拷贝重组酵母表达E2蛋白的最佳条件为：在BMGY中培养至菌体OD₆₀₀值达3～3.5时，将菌体转入相当于4倍体积BMGY、pH6.0的BMMY培养基中培养72h，每24h加入甲醇使终浓度达0.5％～1.0％。在最佳条件下E2AD蛋白的表达量可达275.38ug／mL，是E2BC蛋白的22.39倍，是A／D区基因原核表达产物E2HA蛋白的35.53％；通过比较不同温度下保存E2AD蛋白的降解率得出酵母培养物上清应保存于-20℃。 3．以E2AD蛋白作为包被抗原初步建立了检测猪瘟抗体水平的间接ELISA方法，并对该方法的实验步骤进行了优化，优化后的步骤是：0.688μg／100uL抗原4℃过夜包被后，用1％BSA封闭3h，再与1％BSA稀释的血清作用45min，接着与酶标二抗在37℃作用30min或室温下作用45min，然后用TMB在37℃作用15min或室温下作用20min，最后用0.15％HF终止反应，用此优化方法检测了30份来自发病猪场的待检猪瘟阳性血清样品，并将其与以E2BC蛋白及以E2HA蛋白作为包被抗原的两种间接ELISA方法和兰州兽医所的间接血凝试剂盒方法相比较，发现间接ELISA方法比间接血凝试剂盒方法敏感，以三种不同蛋白建立的间接ELISA方法的敏感性从高到低依次为：E2HA＞E2AD＞E2BC。