论文部分内容阅读
目的:我们之前的研究表明IL-27与子痫前期(PE)的发病密切相关,IL-27可诱导滋养细胞产生促炎效应。本研究是为了探究IL-27是否通过影响滋养细胞的功能参与子痫前期的发病以及其相关机制。方法:本研究用CCK-8、Ed U增殖实验和流式凋亡实验检测了IL-27是否能够影响滋养细胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡。然后收取正常早孕期绒毛组织进行绒毛外植体实验,检测IL-27是否影响外植体的外生性生长。通过Transwell和划痕实验检测IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo侵袭和迁移能力的影响。Western Blotting检测IL-27刺激滋养细胞株HTR8/SVneo后上皮间质转化(EMT)标志物的改变。并使用免疫荧光观察IL-27对外植体和滋养细胞株HTR8/SVneo的EMT标志物表达的影响。Western Blotting检测IL-27刺激滋养细胞株HTR8/SVneo后STAT1和STAT3的激活情况。分别使用STAT1 si RNA和STAT3 si RNA转染滋养细胞株HTR8/SVneo后观察IL-27对其侵袭和迁移能力的影响。最后使用Western Blotting检测子痫前期和正常胎盘组织中STAT1的磷酸化水平。结果:IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡并无明显的影响,但可显著抑制其侵袭和迁移的能力,并明显抑制外植体的外生性生长。IL-27可使滋养细胞株HTR8/SVneo的上皮标志物(β-catenin)的表达增强,使其间质标志物(vimentin)的表达减弱。在绒毛外植体试验中,IL-27刺激后的外植体绒毛外滋养细胞的上皮标志物(E-cadherin和β-catenin)的表达增强,而间质标志物(vimentin)的表达减弱。IL-27可以明显激活滋养细胞株HTR8/SVneo中的STAT1和STAT3。选择性抑制STAT1和STAT3的表达后发现,STAT1的表达受到抑制后可削弱IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo的EMT标志物的表达的影响,以及对其侵袭和迁移能力的影响,但抑制STAT3的表达则不能。与正常孕妇相比较,子痫前期孕妇的胎盘组织中STAT1的磷酸化水平是升高的。结论:IL-27可能主要是通过激活STAT1抑制滋养细胞的EMT过程,从而抑制其侵袭和迁移能力参与子痫前期的发病。目的:探讨IL-27参与原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能受损的信号通路,及其在子痫前期发病机制中的作用。方法:(1)使用Western blot检测子痫前期和正常足月胎盘组织中IL-27及其受体WSX-1的表达;(2)分离并培养原代人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光的方法鉴定HUVECs细胞;(3)对原代HUVECs予以50 ng/m L人重组IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法检测JAK2、STAT1的活化情况;(4)使用JAK的特异性抑制剂AG490处理原代HUVECs后,分为六个处理组,分别是空白对照组(Con)、DMSO组、抑制剂组(AG490),IL-27处理组(IL-27)、IL-27和DMSO共同处理组(DMSO+IL-27)、IL-27和抑制剂共同处理组(AG490+IL-27),然后用Transwell和细胞管腔成型实验检测IL-27对原代HUVECs血管成形能力的影响。结果:(1)IL-27及其受体WSX-1的蛋白水平在子痫前期胎盘组织中高于正常足月胎盘;(2)成功在体外建立培养原代人脐静脉内皮细胞的模型;(3)人重组IL-27(50 ng/m L)刺激HUVECs细胞后可以激活JAK2/STAT1信号通路;(4)与相应对照组相比,IL-27组、DMSO+IL-27组的迁移和血管成形能力降低。但是AG490+IL-27组与AG490组相比,并无明显变化。结论:IL-27可能通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病。