【摘 要】
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该论文工作着重对反式剪接人ACAT1 mRNA的翻译及其分子机制进行深入的探索研究.首先,将全长ACAT1 cDNA K1转染AC29细胞,再利用ACAT1特异抗体DM10进行Western blot分析,不仅检
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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该论文工作着重对反式剪接人ACAT1 mRNA的翻译及其分子机制进行深入的探索研究.首先,将全长ACAT1 cDNA K1转染AC29细胞,再利用ACAT1特异抗体DM10进行Western blot分析,不仅检测到50 kDa、而且还有56 kDa这两种不溶性ACAT1蛋白的表达.进而,利用特异识别人ACAT1 cDNA K1 ORF起始密码子AUG上游的同阅读框编码氨基酸序列的一种新制备抗体DM58,结合识别 cDNA K1 ORF起始密码子AUG下游编码氨基酸序列的原有ACAT1特异抗体DM10,对转染表达的ACAT1蛋白进行深入的探索研究.综上所述,该论文工作在进行反式剪接人ACAT1 mRNA的翻译及其分子机制研究中,证实反式剪接人ACAT1 mRNA可翻译产生酶活性不同的两种ACAT1蛋白,并且详细研究获得的实验结果揭示,ACAT1小蛋白(50/17kDa)是由1号染色体来源的AUG<,1397-1399>密码子起始翻译产生,该密码子上游茎环结构有助于选择其作为主要的翻译起始密码子;ACAT1大蛋白(56/25kDa)是由7号染色体来源的非AUG密码子GGC<,1274-1276>起始翻译产生,其上游茎环结构增强从GGC<,1274-1276>的起始翻译.该工作通过对反式剪接成熟的人ACAT1 mRNA的翻译水平探索研究,发现该mRNA编码翻译产生一种新的ACAT1异构体酶;并阐明该mRNA具有可选择性的上游非AUG和下游AUG两类不同的起始翻译机制.这些为深入探索ACAT在胆固醇代谢平衡中生理功能、病理变化的作用提供了重要的分子基础和研究线索,也丰富了对真核生物mRNA起始翻译的理解.
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