目的:1.建立木瓜有机酸的多指标评价方法,为评价木瓜有机酸提供依据。2.考察木瓜中水溶性有机酸、三萜酸以及总有机酸的提取纯化工艺,建立最佳提取纯化工艺路线,为木瓜中有机酸的研究奠定基础。3.对木瓜有机酸分别采取传统的萃取方法和离子交换树脂法进行纯化,比较两种方法的差异,为后期木瓜有机酸的深度开发提供依据及实验资料。4.探讨不同产地、不同品种木瓜中水溶性有机酸的差异,为木瓜药材品质的研究提供依据。5.考察宣木瓜不同部位水溶性有机酸的分布特征,为宣木瓜有机酸的研究提供依据。方法:1.采用电位滴定法、分光光度法对木瓜中总有机酸、总三萜酸的含量进行测定。2.采用高效液相色谱法对木瓜中水溶性有机酸成分、三萜酸类成分进行定性定量分析。3.采用传统的萃取和离子交换树脂法纯化木瓜中的有机酸,运用多指标评价方法评价并确定最佳提取纯化工艺。4.采用高效液相色谱法对不同产地、不同品种木瓜中水溶性有机酸进行定性定量分析。5.采用高效液相色谱法对宣木瓜不同部位酸性物质进行定量分析,为了解酸性物质在果实的分布提供资料。结果:1.建立水溶性有机酸液相色谱条件,选取Ultimate AQ-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以0.5%磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节p H值至2.2)和乙腈为流动相,梯度洗脱,三波长切换,同时检测了木瓜奎尼酸、苹果酸、莽草酸、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸的含量。建立三萜酸类成分液相色谱条件,选用Shim-pack CLC-ODS(M)(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(265:35:0.1:0.05)为流动相,检测波长:210nm,流速:0.6m L/min,柱温:20℃。同时检测了木瓜山楂酸、科罗索酸、白桦酯酸、齐墩果酸、熊果酸的含量。2.在多指标评价下,建立了木瓜有机酸的提取纯化工艺。水溶性有机酸提取纯化工艺:50%乙醇,料液比1:20,超声60min,过滤,滤液浓缩至无醇味,以1mol/L盐酸酸化至p H为2左右,用等体积正丁醇萃取2次,合并萃取液,减压回收溶剂。三萜酸提取纯化工艺:85%乙醇,料液比1:25,回流60min,滤过,滤液置旋转蒸发仪减压蒸干溶剂,精密加入10m L蒸馏水复溶,以1mol/L的氢氧化钠碱化至p H为11至12,用等体积石油醚萃取至石油醚层无色,取水层,以1mol/L盐酸酸化至p H为2左右,用等体积乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层无色,取乙酸乙酯层,减压回收溶剂。总有机酸提取纯化工艺:75%乙醇,料液比1:8,回流提取,提取时间2h,提取次数2次,最佳纯化工艺是:717型阴离子交换树脂,上样溶液浓度1g/m L,样品液p H为10,HCl洗脱液浓度为0.3 mol/L,流量为3m L/min。此工艺下所得宣木瓜总有机酸质量分数可达67.66%。3.对宣木瓜、湖北木瓜、四川木瓜、云南木瓜以及光皮木瓜中的水溶性提取部位所含有机酸进行定性定量分析,结果显示,宣木瓜作为道地药材在其水溶性有机酸的含量上有一定优越性,并且各产地木瓜中水溶性有机酸的含量均明显高于光皮木瓜。4.宣木瓜不同部位酸性物质测量结果显示,果皮中含量略高于果肉,种子中6种有机酸含量最少;在果皮和果肉中,基本呈现出含量高低顺序为:苹果酸>莽草酸>奎尼酸>绿原酸>咖啡酸>原儿茶酸。结论:本课题通过多指标评价方法优选出制备木瓜不同极性有机酸的最佳提取工艺,对木瓜有机酸提取物分别采取传统的萃取法与离子交换树脂法进行提取纯化,比较两种方法的差异性,以期为木瓜有机酸部位的提取纯化建立更加有效的方法。建立高效液相色谱法通过对不同产地、不同品种木瓜中有机酸进行评价,试验结果发现在木瓜有机酸类成分中,水溶性有机酸含量相对较高,提取药渣中含有三萜酸类成分,但含量较低,以试图揭示木瓜“味酸为佳”药用品质归属的物质基础。而宣木瓜作为道地药材在有机酸的含量上表现出一定的优越性,且光皮木瓜在有机酸成分和含量上与皱皮木瓜的显著差异。并对道地药材宣木瓜不同部位中的水溶性有机酸的分布进行了系统的研究,为诠释木瓜的物质基础提供了科学依据。