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近年来,各类媒体报道的掺假造假肉制品事件给消费者、政府部门敲响了警钟,现有的实验室检测方法不能满足市场检测的需求。本课题研究将交叉引物等温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条(Nucleic acid test Strip,NTS)检测方法相结合,建立一种针对单一动物源性成分核酸快速检测的新方法。研究结果如下:1、比对鸭、羊、猪、牛、鸡的mt DNA基因序列,分别筛选出鸭D-loop基因上、羊Cytb基因上及猪D-loop基因上的特异性片段;2、根据CPA反应原理,分别使用3种方成功在特异性片段上设计并筛选出CPA引物和探针;3、针对特异性片段,设计PCR引物并制备含目的片段的质粒;4、通过优化实验得到各因素的最佳范围:交叉引物的浓度范围为0.6μmol·L-1~0.8μmol·L-1,标记引物的浓度范围为0.4μmol·L-1~0.6μmol·L-1,镁离子浓度范围4 mmol·L-1~8 mmol·L-1,甜菜碱浓度对扩增无显著影响,反应45~60min即可满足CPA扩增的要求;5、特异性实验中,3种动物源性成分检测方法均具有良好的检测特异性。鸭源CPA检测方法对羊、牛、鸡、猪源成分无交叉反应,羊源CPA检测方法对鸭、牛、鸡、猪源成分无交叉反应,猪源CPA检测方法对羊、牛、鸡、鸭源成分无交叉反应;6、鸭源性成分CPA检测方法对单一鸭源成分的检出限为0.1 ng·μL-1,对混合样品的检出限可以达到1%。羊源性成分CPA检测方法的单一成分检出限达到1000cpoies·μL-1,对混合羊肉制品的检出限同样达到1%。猪源性成分CPA检测方法对单一猪源成分的检出限仅为1 ng·μL-1,对混合猪肉的检出限仅达到10%;7、CPA检测方法在重复性实验中表现出良好的稳定性;本课题研究的3种动物源性成分核酸检测方法,对混合肉制品的检测特异性良好、操作简单、设备依赖程度低,检测灵敏度基本达到动物源性成分PCR的检测水平,有发展成为动物源性成分核酸快速检测手段的潜力。