【摘 要】
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目的:结核病（Tuberculosis）是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis Mtb）感染引起的人类重大传染病之一。小鼠细胞内病原体抗性1（Ipr1）基因位于结核病的超易感性位点1（sst1）内,已被确定为可以抑制结核杆菌在宿主细胞内的增殖,介导巨噬细胞对病原体的抗性。SP110是Ipr1人类的同源基因,有研究显示SP110定位于核体,并且可能起转录助激活剂作
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目的:结核病（Tuberculosis）是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis Mtb）感染引起的人类重大传染病之一。小鼠细胞内病原体抗性1（Ipr1）基因位于结核病的超易感性位点1（sst1）内,已被确定为可以抑制结核杆菌在宿主细胞内的增殖,介导巨噬细胞对病原体的抗性。SP110是Ipr1人类的同源基因,有研究显示SP110定位于核体,并且可能起转录助激活剂作用,其单核苷酸多态性和宿主结核病易感性密切相关。但是关于SP110以何种方式调控宿主细胞的结核抗性机制尚不清楚,因此研究SP110在细胞免疫应答的中的调控对理解机体对抗胞内病原体有重要作用。方法:（1）结核卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）侵染THP-1巨噬细胞,提取0h,6h,12h,24h,48h的巨噬细胞的mRNA和总蛋白,实时荧光定量PCR（RT-q PCR）和Western Blot检测SP110、NF-κB信号通路相关基因（IKBα、p65、P-IKBα、P-p65）、促炎性因子（IL-1、IL-6、TNF-α）、细胞凋亡相关基因BCL-2、BAX的表达情况;（2）设计合成si RNA-SP110和构建PCDNA3.1-SP110过表达载体,建立SP110基因表达敲减和基因过表达细胞模型,细胞免疫荧光验证SP110核定位情况。（3）以BCG侵染经SP110干扰和过表达状态下的THP-1巨噬细胞,收集24h细胞总mRNA和蛋白,对促炎性因子（IL-1、IL-6、TNF-α）、NF-κB信号通路关键蛋白（p65、P-p65）、细胞凋亡相关基因BAX、BCL-2进行定量检测,同时探究BCG感染巨噬细胞的情况下SP110不同表达水平对细胞活力、细胞凋亡及胞内活菌数的影响。探讨SP110是否参与BCG体外感染巨噬细胞诱发的炎症反应和细胞凋亡。结果:（1）BCG感染后,巨噬细胞内促炎性因子（IL-1、IL-6、TNFα）表达量显著提高（P＜0.001）,NF-κB信号通路相关分子（IKBα、p65、P-IKBα、P-p65）,细胞凋亡标志性分子BAX表达量显著提高（P＜0.001）、抑凋亡标志性分子BCL-2表达量显著降低（P＜0.001）,SP110表达量显著提高（P＜0.001）,该趋势在24小时最为明显。（2）si SP110-1、si SP110-2、si SP110-3、且si RNA-SP110-3干扰效率为70%（P＜0.001）;构建PCDNA3.1-SP110过表达载体,过表达效率约为5倍（P＜0.001）,成功建立SP110基因表达调控模型。（3）BCG感染期间,SP110的干扰有效降低了促炎性因子（IL-1、IL-6、TNFα）的表达（P＜0.001）,NF-κB p65及其蛋白磷酸化的表达水平显著降低,降低了细胞凋亡标志性分子BAX表达（P＜0.001）,提高了抑制凋亡相关分子BCL-2的表达（P＜0.001）,降低了宿主细胞在BCG侵染后的凋亡率（P＜0.001）,提高了BCG胞内存活数量（P＜0.001）;BCG感染期间,SP110的过表达有效促进了促炎性因子（IL-1、IL-6、TNFα）的表达（P＜0.001）,NF-κB p65及其蛋白磷酸化的表达水平显著增加,增加了宿主细胞在BCG侵染后的凋亡效率,降低了BCG胞内存活数量。结论:SP110可通过激活BCG感染的巨噬细胞NF-κB信号通路,诱发促炎性因子释放,诱导巨噬细胞凋亡,降低BCG的胞内存活等途径在结核病形成中发挥调控作用。
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