血清miR-210的检测及其在结直肠癌诊断中的应用研究

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目的:通过检测结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)患者中血清miR-210表达水平,分析其与患者临床病理特征的相关性,并探讨血清miR-210对CRC诊断的临床意义。方法:1.通过逆转录实时荧光定量PCR(reverse transcription quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测60例CRC患者血清(实验组)和60例来我院健康查体者(对照组)血清的miR-210的表达水平,分析实验组血清miR-210表达水平与其临床病理参数间的关系。2.通过术后随访选取实验组中30例术后复发患者,检测其术后1月和术后复发时患者血清中miR-210的表达水平,利用患者血清miR-210表达差异分析其动态变化趋势。3.采用全自动电化学免疫分析仪检测两组受试者血清CA199及CEA的水平,绘制miR-210、CA199及CEA的ROC曲线,得出三者各自诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)。利用miR-210的ROC曲线,结合约登指数定义,得出miR-210的诊断临界值。4.根据CEA和CA19-9试剂盒诊断参考值和实验求得的miR-210诊断临界值,分别计算出120名受试者真假阳性例数,即a、b、c、d值,运用公式:敏感性=a/a+c;特异性=d/b+d;阳性预测值=a/a+b;阴性预测值=d/c+d;准确率=(a+d)/(a+b+c+d),分别计算出三者诊断结直肠癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确率,由此比较CEA、CA19-9及miR-210对结直肠癌的诊断效能。结果:1.通过逆转录实时定量PCR方法检测实验组和对照组血清miR-210水平得出,实验组患者血清miR-210的水平显著高于对照组患者血清miR-210水平(P<0.0001)。实验组患者血清miR-210表达水平分别与结直肠癌肿瘤大小、浸润程度、淋巴结是否转移及TNM分期有明显相关性,统计得出P值分别为:0.037、0.031、0.001及0.003,均小于0.05,有统计学意义:实验组血清miR-210表达水平与患者性别、年龄大小、肿瘤分型及肿瘤分化程度无相关性(P均>0.05)。2.实验组中30例术后随访复发患者行腹腔镜辅助结直肠癌根治术后1月后血清miR-210表达较术前显著降低(P<0.001),而术后出院随访期间发生局部复发或远处转移时的血清miR-210表达水平较术后1月时显著升高(P<0.001)。3.通过绘制]miR-210、CEA及CA19-9诊断CRC的ROC曲线,分别得出三者的曲线下面积(AUC)为0.825、0.662及0.613。根据约登指数定义得出miR-210诊断CRC的临界值为33.57。比较三者AUC值得出miR-210对CRC的诊断准确性均高于CEA(Z=2.601,P<0.01)及CA19-9(Z=3.253,P<0.01)的准确性。4.利用miR-210、CEA及CA19-9的诊断临界值分别计算120名受试者真假阳性例数,即a、b、c、d值,运用公式:敏感性=a/a+c;特异性=d/b+d;阳性预测值=a/a+b;阴性预测值=d/c+d;准确率=(a+d)/(a+b+c+d),计算出miR-210诊断结直肠癌的敏感性为73.3%,特异性为78.3%,阳性预测值为75.9%,阴性预测值为74.2%,准确性为75%,均高于CEA诊断结直肠癌的敏感性(60%)、特异性(66.7%)、阳性预测值(64.3%)、阴性预测值(62.5%)、准确性(63.3%)及CA19-9诊断结直肠癌的敏感性(50%)、特异性(65%)、阳性预测值(58.8%)、阴性预测值(56.5%)、准确性(57.5%)。因此得出miR-210对结直肠癌的诊断效能高于CEA及CA19-9。结论:循环miR-210在结直肠癌患者中高表达,检测其水平有助于提高结直肠癌的诊断率,进而有望成为一种新的结直肠癌诊断的非侵入性分子标志物。
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