链霉菌TD-1中生物色素的提取纯化工艺及应用研究

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链霉菌是一种革兰氏阳性丝状放线菌,可产生多种类型的具有重要价值的次级代谢产物,如抗生素、免疫调节剂等。研究表明,链霉菌在合成活性次级代谢产物的同时常产生各种水溶性或脂溶性的色素,具有较高的工业附加值。天然色素由于它的安全系数较高,一直备受各个领域亲睐。链霉菌次级代谢产物中的天然色素不仅可以用作染料,推测还有抑菌等功效,双重功效的优势使其具有极大的发展前景。利用玉米淀粉和豆粕粉为链霉菌提供碳源与氮源,链霉菌生产色素的能力要高于其他工业培养基,添加无机盐对链霉菌色素没有显著影响;通过液体摇瓶法进行链霉菌发酵培养,链霉菌色素在7-8 d时产生色素的能力最强,菌丝体颜色较深。以链霉菌发酵第七天菌丝体为原料,通过Box-Behnken实验设计,采用响应面法优化了色素提取工艺,确定了最佳的链霉菌色素提取条件为:(1)桔红色色素提取条件,正己烷提取,液料比50:1,超声功率100 W,提取时间为30 min;(2)桔红色色素提取条件,甲醇提取,料液比50:1,超声功率100 w,提取时间为15 min。利用硅胶柱柱层析技术、高效液相色谱技术以及高速逆流色谱技术对链霉菌色素粗提物进行分离纯化,发现最佳硅胶柱分离洗脱条件为乙酸乙酯:正己烷(4:1,V/V),可得到三种粗提组分,且在不同正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系中的分配比例不同。橘红色色素在上相中的K值均相近,而枚红色和黄色在上下相中K指数相差较大,正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=6:4:7:3为链霉菌色素的最优高速逆流色谱分离条件。链霉菌混合色素溶液在常温下相对比较稳定,但对高温较为敏感。日光照射对色素稳定性也存在影响,纯化后的枚红色色素与未纯化混合色素相比,纯化后的枚红色色素在第12天开始出现急剧下降趋势,未纯化的混合色素在阳光照射15d期间下降趋势较为平稳。此外,研究表明,链霉菌色素对蛋白类织物的附着能力较佳,通过对链霉菌色素上染羊毛织物工艺进行探索,乙醇:水为1:4,浴比1:30,染色温度95℃,染色时间80 min,色素用量5%o.w.f.,不添加助剂,不调节pH值为最佳染色条件。
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