目的:华法林引起的心脏瓣膜钙化是临床上不容忽视的新不良反应,但目前对其机制的研究尚未被充分认识。本研究旨在探究一种新的蛋白——肽酶抑制蛋白PI16在华法林诱导的主动脉瓣瓣膜钙化病变中的作用。方法:采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测人的瓣膜组织中PI16的表达情况。体外分离培养猪的主动脉瓣膜间质细胞（AVICs）,采用Ad-MCMV-PI16-HA-P2A-GFP腺病毒感染猪主动脉瓣膜间质细胞过表达PI16,48h后予华法林1.Oumol/L诱导AVICs钙化,收集钙化后的RNA进行RT-PCR检测钙化相关指标MGP、ON、BMP2表达情况;收集蛋白进行western blot检测PI16以及钙化相关指标RUNX2、SOX9表达情况以及相关信号通路关键分子p53,p21,akt308等的表达以及组蛋白水平的变化;并通过ALP含量检测、茜素红染色、钙含量检测明确PI16在钙化中的作用。构建PI16不同结构域的突变表达载体转染293t细胞,采用免疫共沉淀（Co-IP）方法鉴定出PI16的关键结构域。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）方法探究PI16调控组蛋白转录后修饰的具体机制。在体内通过采用EF1-α启动子构建PI16过表达转基因小鼠模型,予华法林+维生素K皮下注射法构建小鼠瓣膜钙化模型。采用茜素红染色确认钙化模型的建立,并用免疫荧光染色对体外机制进行验证结果:1.RT-PCR和免疫荧光染色证实PI16特异性的表达在人主动脉瓣膜间质细胞,并在华法林诱导的瓣膜间质细胞中以及主动脉瓣瓣膜钙化组织中表达下调。2.信号通路的筛查表明过表达PI16通过抑制p53和akt信号通路从而抑制钙化。3.Co-IP及免疫荧光证实PI16是通过41-50区段的氨基酸直接与p53结合从而影响p53的入核以及HDAC1的水平,而ChIP证实PI16通过增加HDAC1从而影响了 p53和p21启动子的激活。4.而过表达p53或者予以HDAC抑制剂后则会逆转PI16的抗钙化作用。结论:我们的研究提示肽酶抑制蛋白PI16可直接与p53结合进而抑制了华法林诱导的瓣膜钙化,为临床上深入了解华法林诱导的心脏瓣膜钙化和寻找新的干预方法提供依据。