研究背景皮肤是人体最大及最外部的器官,除了作为抵御各种外伤的生物屏障外,在维持体内内环境稳定上起重要作用。最近的研究表明：皮肤是一个内分泌器官,又是一个激素神经递质敏感性器官。皮肤的神经-内分泌系统包括局部产生神经—内分泌介质与相应的特异性受体通过旁分泌和自分泌产生作用,在组织修复与再生过程中扮演重要角色。肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)是调节机体功能的几个重要激素系统之一。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)是RAS最重要的生物活性肽,在调节血压及水电解质平衡方面起重要作用。近十年来,RAS的研究进入了一个崭新阶段,即除经典的作用外,局部的AngⅡ还作为一个多效应生长因子可影响细胞的增殖、凋亡和分化,并在组织损伤修复中起重要作用。研究提示：皮肤是RAS的靶器官之一,RAS在诸多层面参与皮肤组织的自我更新和损伤修复。因此深入探讨RAS在皮肤损伤修复过程的作用和机制将有可能为难愈性创面及瘢痕的治疗提供新的方法和手段。研究目的本研究探讨AngⅡ产生及其受体AT1和AT2在创面愈合过程中表达的组织细胞定位和mRNA水平的变化,期望证明在皮肤组织损伤后局部RAS被激活,并初步阐明RAS重要成份的变化情况；并在此基础上观察这种变化与创面愈合过程中修复细胞增殖和凋亡活动之间的关系,初步探讨这个重要的应激激素和多效应生长因子在创伤修复中可能的作用,为难愈性创面的修复和瘢痕的治疗提供新的思路。研究方法1.在小鼠背部切取直径为6mm圆形全层皮肤,制作全层皮肤缺损创面模型,在创面形成后第0、3、5、7、9、13、15天创面照相,切取创面组织标本,分别用液氮保存及10%中性甲醛固定。2.采用酶联免疫的方法连续动态观察创面愈合过程中AngⅡ产生的变化。3.采用免疫组织化学、聚合酶链式反应(RT-PCR)和real-time PCR技术连续动态观察创面愈合过程中AngⅡ受体AT1和AT2表达的组织细胞定位和mRNA水平的变化。4.采用免疫组织化学技术连续动态观察创面愈合过程中创面上皮化、肉芽组织形成、细胞增殖和凋亡的变化。研究结果小鼠背部全层缺损创面愈合时间：小鼠全层皮肤缺损创面约在第9天创面完成上皮化。肉眼观创面愈合天数9.2±0.42天。小鼠创面愈合过程中创伤局部组织AngⅡ含量的变化：创面局部组织AngⅡ产生在伤后逐渐增加,在第7天达到峰值,以后逐渐下降。在观察期内局部组织AngⅡ含量仍未回到伤后第0天的水平。AT1和AT2受体蛋白在小鼠皮肤创面愈合过程中表达的变化：在正常小鼠皮肤AT1和AT2受体在整个表皮层均有阳性表达,在真皮层,AT1和AT2受体仅在微血管内皮细胞有阳性表达。在创面愈合过程中,AT1受体在角质形成细胞、成纤维细胞都有表达,阳性染色信号在伤后逐渐增加,在第7天最强,以后逐渐下降。AT2受体阳性染色信号也在伤后逐渐增加,在7天以后逐渐下降。但当创面上皮化完成后,AT2受体阳性染色信号再次增加。AT1和AT2受体mRNA在小鼠皮肤创面愈合过程中表达的变化：在小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中,AT1和AT2受体mRNA均有表达。AT1受体mRNA表达在伤后第7天达到峰值,以后逐渐下降。AT2受体mRNA表达在伤后逐渐增加,在7天以后逐渐下降,但在创面上皮化完成后表达再次增加。小鼠创面愈合过程中BrdU标记指数的变化：代表细胞增殖的BrdU标记指数也在伤后逐渐增加,创面中央及创面边缘阳性细胞都在第7天达到峰值,以后逐渐下降。小鼠创面愈合过程中TUNEL染色阳性细胞数的变化：代表细胞凋亡的TUNEL染色阳性细胞数在伤后即开始缓慢增加,创面中央在完成上皮化后增加趋势更为明显,创面边缘则略有下降。结论在创面愈合过程中,RAS被激活；AngⅡ可能通过其产生及受体表达的变化调控创面的愈合及后期的塑形改建。AT1受体可能与细胞增殖活动密切相关；AT2受体可能与细胞凋亡及愈合过程中组织重建有关。