【摘 要】
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该研究将含有N末端信号肽和C末端毒性区缺失的PAP基因的表达载体pPIC9K-P用Sal Ⅰ酶切线性化后,通过电击转化整合P.pastorisGS115菌株细胞中.PCR筛选出利用甲醇快速型(Mut)的
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该研究将含有N末端信号肽和C末端毒性区缺失的PAP基因的表达载体pPIC9K-P用Sal Ⅰ酶切线性化后,通过电击转化整合P.pastorisGS115菌株细胞中.PCR筛选出利用甲醇快速型(Mut<+>)的重组子后用双膜免疫杂交法筛选出表达量较高的重组菌株.通过摇瓶培养初步摸索了诱导时间、甲醇浓度、培养基pH值等培养条件对Mut<+>重组菌株表达PAP的影响.SDS-PAGE分析结果表明,Mut<+>重组菌株在甲醇诱导第四天后PAP在培养液中积累量达到最高水平,延长培养时间会导致产量下降;在10g/L的甲醇浓度诱导下,PAP的表达量达到最高;培养基pH值在偏酸性条件下(6.0-6.4)PAP的表达量都维持在较高的水平.
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