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目的:通过制备两亲性靶向多肽载体P15（YIGSRHHHLLLGFLG）包载紫杉醇（PTX）得到靶向药物输送纳米微球P15-PTX;通过细胞实验确定P15-PTX相比PTX具有更加良好的抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、细胞摄取率高的优点,并通过分析细胞周期变化和细胞内相关蛋白的表达情况确定其主要作用机制;确定P15-PTX在动物模型中的治疗效果,相比PTX对各器官的毒副作用以及作用机制,以期在癌症诊断治疗这一世界性难题方面做出有特色的工作并提出有潜在应用价值的新技术和方法。方法:1.采用固相合成法、高效液相色谱法合成并纯化P15;2.对P15合成条件进行优化;3.采用透析法得到P15包载紫杉醇的纳米微球P15-PTX并对P15-PTX进行形态、大小、结构的表征并计算其载药率、包封率以及临界胶束浓度（CMC）;4.通过模拟不同p H值（p H=1.2、p H=4.5、p H=6.8、p H=7.2）,探究P15-PTX的体外释药规律及释药方程;5.以人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,利用细胞增殖试验和细胞凋亡实验计算P15-PTX的肿瘤细胞增殖抑制率和诱导肿瘤细胞凋亡的能力;6.采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测PTX和P15-PTX的作用周期;7.采用激光共聚焦显微镜进行细胞摄取实验,观察MCF-7细胞对P15-FITC-PTX和FITC-PTX的摄取效果差异;8.采用免疫印记实验检测细胞中67LR蛋白、ERK1/2蛋白、基质金属蛋白酶MMP-9蛋白、bcl-2蛋白和caspase-9蛋白含量的表达变化;9.以BALB/c荷瘤小鼠和4T1小鼠乳腺癌细胞建立小鼠肿瘤模型,计算肿瘤体积变化曲线,绘制瘤体质量对比图;10.取小鼠尾静脉血、眼球血检测各项生理指标和生化指标;11.将小鼠各组瘤体取出,分析其中bcl-2蛋白和caspase-9蛋白含量的变化;12.将小鼠各组织取出,检测同等时间内药物含量分布情况;13.制作病理组织切片,观察HE染色结果。结果:1.测得多肽分子量为1719.996,符合目标产物的分子量,纯化后纯度约为94.08%。2.在其它条件相同的情况下控制变量树脂种类、投料摩尔比和催化剂,最终在使用2-Cl树脂、投料摩尔比为1:0.5和催化剂为HBTU时连接率最高,即树脂与氨基酸的连接效果最好;3.P15和PTX以6:1的最佳比例混合后形成了形态规则圆润的微球;P15-PTX复合物呈圆球形,且形态、粒径大小较为均一,平均粒径约为300-600 nm;根据公式计算出载药率和包封率分别为29.61%和34.28%;CMC值约为0.0032 g/L;4.P15-PTX的体外释药具有p H依赖性,在p H7.4的缓冲溶液中,2 h累积释药4.7843%,80 h累积释药9.2465%;在p H6.8的缓冲溶液中,2 h累积释药7.5908%,80 h累积释药19.3627%;在p H4.5的缓冲溶液中,2 h累积释药12.8312%,80h累积释药22.14569%;在p H1.2的缓冲溶液中,2h累积释药13.9029%,80 h累积释药25.0744%,与释药方程中的Ritger-Peppas模型相关性最高;5.PTX和P15-PTX在浓度为25μg/m L时,细胞存活率分别为72.2±4.8%和53.5±3.55%;在浓度为400μg/m L时,细胞存活率分别为46.9%±2.46%和30.2%±1.91%;P15-PTX的细胞抑制率相比较PTX分别提高了1.61倍、1.31倍;紫杉醇含量相同情况下,PTX在50μg/m L时的细胞凋亡率为11.7%,200μg/m L时为29.9%,400μg/m L时为47.6%,等浓度的P15-PTX在50μg/m L时的细胞凋亡率为29.2%,200μg/m L时为41.2%,400μg/m L时为67.3%,紫杉醇含量相同的情况下,P15-PTX促进MCF-7细胞凋亡的效果平均比PTX高1.54倍;6.在G1期,PTX与P15-PTX的含量下降,S期含量也有所降低,G2期含量明显升高,其中,P15-PTX G2期的含量为44.83%,PTX G2期的含量为18.86%,P15-PTX阻滞增幅比PTX提高了2.37倍;7.P15-FITC-PTX和FITC-PTX主要富集在细胞质中,且在30min、8h时,P15-FITC-PTX的荧光强度比FITC-PTX要强许多;8.在β-actin等量的情况下,ERK1/2蛋白和caspase9蛋白随着药物浓度的增加,表达明显上升;MMP-9蛋白和bcl-2蛋白随着药物浓度的增加,表达明显下降;9.与PBS荷瘤对照组相比,PTX组与P15-PTX组的瘤体质量均有所下降,其中P15-PTX组治疗效果更加明显;10.与空白对照组和PBS对照组相比,PTX组和P15-PTX组的WBC、RBC、PLT、NEUT%、LYM%、TP和ALB均有所下降,ALT、ALP和Bun均有所上升,其中PTX组上升和下降的水平更加明显;11.在β-actin等量的情况下,caspase9蛋白随着药物浓度的增加,表达上升;bcl-2蛋白随着药物浓度的增加,表达下降;12.同等时间内,进入瘤体的PTX含量约为19.67%,P15-PTX含量为92.78%,同比提升了约4.72倍;13.观察结果见第三部分讨论。结论:1.通过固相合成法得到的P15肽具有良好的负载药物的能力,所制备的P15-PTX具有粒径小、形态规则、易溶解、毒性低、靶向性高且具备良好的释药能力等优点;2.P15-PTX的部分作用是阻滞肿瘤细胞的G2/M期,有良好的肿瘤细胞增殖抑制能力和摄取能力,并通过调控bcl-2等多种蛋白表达诱导细胞凋亡;3.P15-PTX对荷瘤小鼠具有良好的治疗效果,并且毒副作用远低于PTX,具有较强的靶向性,提示了两亲性多肽对于新型药物载体构建的潜力。