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本文为缓解野生冬虫夏草稀缺问题,以北冬虫夏草菌(CS-4)为研究对象,进行深层液体发酵(SMF)研究,并以CS-4菌丝体腺苷类物质含量为指标,优化20L发酵罐扩培条件,采用响应面法优化超声-微波联合提取腺苷类物质工艺,通过紫外分光光度法、薄层色谱扫描法(TLCS)和高效液相色谱法(HPLC)等定性、定量分析腺苷类物质,利用离子吸附法辅助HPLC分离纯化腺苷类物质,并考察了腺苷类物质的部分生物活性,得到如下结论:1.采用比浊法绘制CS-4菌生长曲线,利用均匀设计试验优化20L发酵罐SMF发酵的结果为:通气量1:1.0~1:1.2v/v·min,转速180r/min,温度24.5~26.5℃,接种量13%,初始pH6.0~7.0。终得到菌丝体的腺苷类物质含量为60.89ug/g。2.利用单因素试验辅助响应面法,优化超声——微波联合提取法提取腺苷类物质,最佳工艺为:用蒸馏水提取,超声15min,微波6min,微波功率440W,料液比300mL/g,除杂后,检测到腺苷类物质提取率为61.24%。3.通过紫外分光光度法、TLCS和HPLC法,分析得到CS-4菌丝体中含有胞苷、尿苷、腺苷、尿嘧啶、虫草素等,经回归方程计算,含量依次为92.54ug/g、305.79ug/g、1.79mg/g、785.85ug/g、695.64ug/g。4.单因素试验辅助正交试验,优化了732强阳离子树脂对腺苷类物质粗纯化工艺,最优上样工艺为:流速2.0BV/h、样液pH值4.0、样液浓度1.6mg/mL、上样量0.8BV;最佳洗脱结果为:洗脱剂0.15mo L/L氨水,洗脱体积4BV,流速2.5BV/h。虫草素经制备型HPLC仪纯化,纯度达94.52%。5.研究了腺苷类物质体外抗氧化活性,结果表明腺苷类物质具有较强的抗氧化能力;同时考察腺苷类物质对四种常见致病菌的抑制作用,结果表明有明显抑菌效果。