淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)YLZ42生物活性代谢产物的研究

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淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)属子囊菌门(Ascomycota),子囊菌纲(Ascomycetes),肉座菌目(Hypocreales),生赤壳科(Bionectriaceae),生赤壳属(Bionectria),是一种能产生多种活性代谢产物的生防菌。本实验室从广西玉林的土壤中分离得到一株淡色生赤壳菌YLZ42,前期研究表明该菌株的发酵产物对一些植物病原菌如甜瓜疫霉、苹果炭疽病菌及一些细菌如蜡样芽孢杆菌等具有具有明显的抑制作用,同时对小菜蛾、棉铃虫等农业害虫具有很强的毒杀效果,这是首次筛选获得能够代谢产生杀虫活性物质的淡色生赤壳菌菌株,该菌产生的活性代谢产物极具开发成为新的微生物杀虫剂及杀菌剂的潜力。因此,有必要对淡色生赤壳菌YLZ42的活性代谢产物进行研究,以加快其作为微生物农药的开发步伐。本论文首先通过萃取及生物活性检测等实验方法确定了发酵液中抑菌和杀虫活性物质不为同一种物质,并对发酵代谢产物的抑菌和杀虫活性稳定性进行了研究,在此基础上设计实验对两类活性物质分别进行了初步的提取分离。  第一章发酵液抑菌活性稳定性及抑菌活性物质的提取分离  以蜡样芽孢杆菌为指示菌,采用活性跟踪的方法研究了温度、pH、紫外线等对发酵液抑菌活性的影响,并对抑菌活性物质进行了提取分离。结果表明在40-60℃温度范围内,淡色生赤壳菌YLZ42发酵液的抑菌活性比较稳定,60℃加热1h,活性损失小于7%;在pH2-7范围内抑菌活性稳定,pH大于8时,活性损失较大,在pH8条件下处理12h活性损失已过半,达到64%;发酵液适宜低温保存,4℃下放置60天后活性仅损失3%,发酵液常温保存时需在酸性环境中,pH4的发酵液在室温下放置15天活性损失小于5%;抑菌活性物质对紫外线不敏感,经紫外照射24h后活性基本不变。抑菌活性物质经乙酸乙酯萃取并浓缩后得到粗品,将其最大吸收波长248nm作为高效液相的检测波长。粗品经过薄层制备及高效液相制备后,得到了一个白色粉末状的活性化合物,其脂溶性良好,极性中等,质谱检测其分子量为513。  第二章发酵液杀虫活性稳定性及杀虫活性物质的提取分离  以卤虫为指示虫,采用活性跟踪的方法研究了温度、pH、紫外线等对发酵液杀虫活性的影响,并对杀虫活性物质进行了提取分离。结果表明在40-80℃温度范围内该菌发酵液杀虫活性比较稳定,80℃加热1h,活性损失小于4%;在pH2-8范围内活性稳定,pH大于10时,活性损失较大,在pH12条件下处理12h活性损失已达到52%;发酵液适宜低温保存,4℃下放置的发酵液,60天后活性损失不足4%,或酸性条件下保存,pH4的发酵液在室温下放置30天后活性损失5%左右;活性物质对紫外线不敏感,经紫外照射24h后活性基本不变。本章用大孔吸附树脂提取发酵液中的杀虫活性物质,并通过解吸、浓缩得到粗品,经紫外-可见全波长扫描确定了粗品的最大吸收波长为210nm;粗品通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层制备后得到了一个较为纯净的杀虫活性物质,在高效液相分析中其峰面积占比达92%。
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