【背景】胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一。早期诊断和早期治疗对提高患者生存率有重要意义，肿瘤标志物检测是早期发现胃癌的重要手段。但是，传统的肿瘤标志物对胃癌诊断的特异性和敏感性低。MGd1是本实验室前期利用淋巴细胞杂交瘤技术成功制备的一株单抗，其抗原命名为MGd1-Ag。初步研究发现该抗原在胃癌中表达明显升高，在血清学诊断中也有一定的价值。目前，基于抗体的分子靶向治疗是肿瘤治疗的热点，本研究发现MGd1在体外能有效抑制胃癌细胞的生长，促进细胞凋亡，有望成为新的治疗胃癌的分子靶点。【目的】在前期研究基础上，系统地观察MGd1-Ag在人体各系统和器官的正常组织和肿瘤组织中的表达和分布。并着重观察其在胃癌中的表达强度与胃癌患者临床病理参数之间及预后的关系。进一步利用蛋白组学方法对MGd1-Ag进行初步鉴定。通过体外细胞学实验，观察MGd1单抗对胃癌细胞的直接杀伤作用，为新的抗体类分子靶向药物的研发奠定基础。【方法】（1）免疫组织化学方法检测MGd1-Ag在人体各组织中的表达和分布，包括全身正常组织和常见的肿瘤组织。（2）检测胃癌、正常胃组织、浅表性胃炎、肠上皮化生、淋巴结转移灶等组织中MGd1-Ag的表达强度和分布。（3）分析MGd1-Ag在胃癌中的表达强度与胃癌各临床病理参数之间的相互关系。从我院收集胃癌术后手术标本，进行随访，利用Kaplan–Meier法绘制生存曲线，并分析MGd1-Ag与胃癌患者预后的关系。（4）Western blot检测MGd1-Ag在胃癌细胞系中的表达。根据Westernblot结果，选用和裂解胃癌细胞系SGC7901和KATOⅢ，利用免疫沉淀和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析对MGd1-Ag进行初步鉴定。（5）激光共聚焦检测MGd1-Ag在胃癌细胞中的定位，流式细胞仪分析MGd1-Ag在胃癌细胞中的阳性百分率。利用体外细胞学实验观察MGd1单抗对胃癌细胞的直接杀伤作用，并从形态学观察细胞的改变。利用流式细胞仪、高内涵细胞分析仪和Western blot检测胃癌细胞经MGd1处理后发生凋亡的比例和相关凋亡分子的变化。【结果】（1）MGd1-Ag在全身33种正常组织中仅在肺上皮细胞中强阳性表达，骨髓造血细胞、食管鳞状上皮表层、部分结肠上皮、唾液腺中的黏液腺体为阳性，在部分皮肤基底细胞和乳腺组织少数腺腔中弱阳性，其余正常组织中均为阴性。在18种肿瘤组织中，胃癌、结直肠癌和肺癌为强阳性表达，在肝胆管癌、胰腺导管腺癌和子宫鳞状细胞癌中为阳性，在肝癌、皮脂腺瘤和精原细胞瘤中为弱阳性，其余检测的肿瘤中均为阴性。（2）在所有检测的正常胃组织和浅表性胃炎中，MGd1-Ag全部为阴性。但是在部分肠上皮化生和不典型增生中为阳性。在胃癌中，分化越差、分期越高、和存在淋巴结转移的，MGd1-Ag的表达越强（P<0.05），而与胃癌患者的性别、年龄没有明显关系。MGd1-Ag在胃癌中的总体阳性率为81.8％（121/148）。Kaplan-Meier生存分析提示MGd1-Ag在胃癌中的表达与胃癌患者的预后密切相关，其表达越强，胃癌患者的生存时间越短。（3）MGd1-Ag在多种胃癌细胞系中均存在较强的表达，但是在永生化胃黏膜上皮细胞系GES中为阴性。（4）裂解胃癌细胞系SGC7901和KATOⅢ，利用免疫沉淀富集MGd1-Ag，再用SDS-PAGE进行分离，Western blot和银染验证，在95kD左右可发现明确的蛋白条带。再经SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝G250染色后，将目的条带切胶送质谱分析，初步鉴定出MGd1-Ag可能为TNFRSF1BIsoform1或ZNF185。（5）激光共聚焦显微镜检测提示MGd1-Ag主要分布于细胞膜，流式细胞仪检测发现胃癌细胞中MGd1-Ag阳性比例可达95％以上。MGd1在体外能直接抑制胃癌细胞SGC7901和AGS的生长，并存在剂量依赖关系。当MGd1浓度为100μg/ml时，细胞增殖明显受到抑制，浓度达到400μg/ml时，其抑制效果达到高峰。流式细胞仪检测和高内涵细胞分析仪均发现，MGd1处理细胞后，凋亡比例明显增加。凋亡相关分子Bcl-2和Cleavedcaspase3表达上调，而Bax表达下调。【结论】本研究检测了MGd1-Ag在人体多种正常和肿瘤组织中的表达，发现该分子仅在少数肿瘤中高表达，主要分布于消化系统肿瘤。MGd1-Ag在肠上皮化生和不典型增生等癌前病变中的表达上调。在胃癌中的表达强度与胃癌的分化、分期和淋巴结转移密切相关。MGd1-Ag的表达还与胃癌患者术后生存时间相关，表达越强，患者生存期越短。通过蛋白组学技术，初步鉴定出MGd1-Ag可能为TNFRSF1B Isoform1或ZNF185。MGd1在体外能有效抑制胃癌细胞增殖和促进细胞凋亡，并呈剂量依赖关系。综上所述，MGd1-Ag有望成为新的胃癌分子标志物和治疗靶点。