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目的:肝脏是一个功能复杂多样的器官,其功能的正常发挥对机体存活有着重要的作用,当肝脏因慢性损伤导致大量的肝细胞被破坏和肝细胞自身的增殖能力受到抑制时,肝卵圆细胞的增殖和分化功能在肝脏的再生修复过程中有着极其重要的作用。肝脏的慢性损伤还会导致肝纤维化的发生,肝纤维化又可能进展为肝硬化,甚至肝癌。课题组之前的实验表明,使用二乙基亚硝胺（DEN）诱导肝脏受损后,Tip30基因敲除小鼠肝脏的重量较野生型的显著降低,提示肝脏的再生修复受到影响。肝卵圆细胞在肝脏慢性损伤的再生修复中发挥着重要作用,而Tip30是否通过影响肝卵圆细胞的增殖和分化,进而影响肝损伤后的再生修复,目前尚未见报道。本研究旨在阐明Tip30敲除对肝卵圆细胞介导的肝再生的影响。方法:1.利用3,5-二乙酯基-1,4-二氢化可力丁（DDC）诱导小鼠的肝损伤,称量小鼠肝脏重量,了解Tip30对小鼠肝再生修复的影响;2.利用DDC诱导小鼠的肝损伤,通过免疫荧光观察Tip30对小鼠体内肝卵圆细胞增殖的影响;3.使用RNA干扰技术沉默Tip30,通过CCK8实验检测大鼠肝卵圆细胞（WB-F344细胞）的增殖能力;4.使用RNA干扰技术沉默Tip30,通过transwell检测WB-F344细胞的迁移;5.使用RT-Q-PCR技术检测干扰Tip30对WB-F344细胞分化的影响;6.使用RT-Q-PCR以及Western Blot技术检测Tip30基因敲除小鼠肝内Wnt/β-catenin信号通路的变化;7.使用RT-Q-PCR以及Western Blot技术检测Tip30基因敲除小鼠肝内Notch1的表达情况;8.使用RT-Q-PCR以及Western Blot技术检测干扰Tip30后WB-F344细胞Wntβ-catenin信号通路的变化;9.使用RT-Q-PCR技术检测干扰Tip30后WB-F344细胞Notch1的表达情况。结果:1.DDC处理后,Tip30基因敲除小鼠肝重与体重比值显著降低;2.DDC处理后,Tip30基因敲除小鼠的肝卵圆细胞数量显著低于野生型小鼠;3.Tip30表达下调可抑制肝卵圆细胞（WB-F344）细胞的增殖;4.Tip30表达下调可抑制WB-F344细胞的迁移;5.Tip30表达下调可促进肝卵圆细胞向胆管细胞分化;6.DDC处理后,Tip30基因敲除小鼠肝内Wnt/β-catenin的表达下调;7.DDC处理后,Tip30基因敲除小鼠肝内Notch1的表达上调;8.Tip30表达下调可抑制WB-F344细胞Wnt/β-catenin的表达;9.Tip30表达下调可促进WB-F344细胞Notch1的表达;结论:1.小鼠体内研究发现,DDC处理后,Tip30基因敲除小鼠肝卵圆细胞增生和迁移受抑制,导致肝损害后小鼠肝实质中的肝卵圆细胞减少,进而抑制肝再生;2.体外细胞研究发现,Tip30表达下调可使WB-F344细胞β-catenin表达下调,提示Tip30表达下调可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,从而导致肝卵圆细胞增殖下降以及向肝细胞分化受到抑制,进而抑制肝再生,同时可通过上调Notch1的表达促进肝卵圆细胞向胆管细胞分化。