乙酰肝素酶HPA与S100A4在结肠癌中的表达及与肿瘤侵袭和转移的关系

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目的结肠癌是消化道肿瘤中最常见的恶性肿瘤。近几年来的死亡率逐步攀升,引起死亡的主要原因是肿瘤的浸润和转移。近年来的试验和临床数据都表明,乙酰肝素酶HPA在结肠癌、胃癌、肝癌、食管癌等消化道肿瘤中高表达,在一些侵袭转移性强的恶性肿瘤中表达更高。其表达量也与病人的预后有紧密联系。S100蛋白家族是一类EF-手型钙结合蛋白,通过对钙离子的调节及与靶蛋白的相互作用,发挥重要的生物学作用,参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程,且其多个成员在多种肿瘤中表达异常,特别是S100A4的异常表达,与肿瘤的侵袭与转移相关。因此S100家族与肿瘤的发生发展关系密切。本研究通过检测结肠癌组织中和正常结肠中HPA和S100A4的表达,探讨两者在结肠癌表达中的相关性,以便为结肠癌患者的诊断和预后提供科学有效的评价指标。方法1、材料70例结肠癌标本来自2007年至2009年在中国医科大学附属第一医院行外科手术切除的结肠癌标本。在这70例标本中均取相应断端未见癌组织作为正常组织进行对照。20例结肠癌新鲜标本来自2009年3月至2009年12月在中国医科大学附属第一医院行外科手术切除的新鲜标本。所有标本均取癌、癌旁(癌组织周围3CM以内)、正常组织(癌组织周围3CM以外)做对照。2、免疫组织化学染色兔抗人乙酰肝素酶多克隆抗体购自Santa公司,兔抗人S100A4多克隆抗体购自中杉金桥公司,SP免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒购白福州迈新生物技术开发公司。染色方法根据试剂盒说明进行。3、Western Blot将含80μg总蛋白的组织裂解产物进行10% SDS-PAGE电泳1.5h后,转印至PVDF膜(65V,2h),脱脂奶粉室温封闭2h,经TTBS冲洗3次,抗HPA多克隆抗体(1:300)4℃孵育过夜后,辣根过氧化物酶标记二抗37℃孵育2h,TTBS洗三次后ECL发光。以β-actin为内对照,以β-actin为内对照,比较各条带灰度值。4、统计分析各组资料利用SPSS for Window 13.0进行统计分析。p<0.05有统计学意义。结果乙酰肝素酶HPA与S100A4在结肠癌组织中的阳性表达率明显高于正常结肠组织。并且两者与患者的性别、年龄、病理组织学类型、分化程度之间没有明显的差异,而与肿瘤的浸润深度和有无淋巴结转移则密切相关,两者的关系为正相关。结论在结肠癌组织中,乙酰肝素酶HPA与S100A4蛋白的表达变化与肿瘤的进展密切相关,是判断其生物学行为,预测转移趋势极具价值的指标。联合检测乙酰肝素酶HPA与S100A4蛋白的表达可用于评定结肠癌的转移潜能。
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