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传统的研究认为，凋亡的细胞不具有免疫原性。然而最近有研究发现，在热激或炎症等环境下，凋亡的细胞可以产生强烈的免疫原性。诱发凋亡肿瘤细胞的免疫原性特性将为更有效地治疗肿瘤疾病提供新的思路和方向。艰难梭菌毒素A (Clostridium difficiletoxin A，TcdA)是由艰难梭菌分泌的主要效应毒素之一，可以诱导多种细胞发生凋亡性死亡，而且具有强烈的促炎症反应特性。基于TcdA可以诱导细胞凋亡和炎症反应的特性，我们拟研究TcdA是否可以诱导肿瘤细胞发生免疫原性凋亡。本课题以小鼠结肠癌CT26细胞作为肿瘤细胞模型探讨了TcdA的抗肿瘤活性。首先，检测TcdA是否能够诱导CT26细胞凋亡，并研究凋亡过程中一些应激蛋白在表达或位置定位水平上的变化；主要内容包括：光学显微镜观察TcdA处理引起的肿瘤细胞形态变化，流式细胞术和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）确认细胞凋亡的发生和半胱天冬氨酸酶（caspase3）的激活，流式细胞术分析钙网蛋白（CRT）的膜转位情况，WesternBlot方法检测热激蛋白(HSP70)的表达或分泌情况。其次，通过树突状细胞（DC细胞）吞噬实验、DC细胞成熟实验、DC细胞与肿瘤共孵育细胞体外刺激T细胞实验等方法探讨TcdA处理的CT26细胞是否可以刺激DC细胞的免疫刺激活性。接着，检测TcdA处理的CT26细胞在小鼠体内诱发的抗肿瘤效应；并且进一步探索这些抗肿瘤效应是否由细胞介导的免疫反应产生，以及这些效应是否具有特异性和长期有效性。研究结果如下：（1）艰难梭菌TcdA能够诱导肿瘤细胞发生凋亡；Caspase活性参与该凋亡过程。（2）TcdA诱导CRT的膜转位和HSP70的胞外分泌，提示了TcdA处理的肿瘤细胞的免疫原性特征。（3）TcdA诱导凋亡的肿瘤细胞可以刺激DC细胞的免疫刺激活性。（4）Tcd A处理的肿瘤细胞在体内的免疫可以刺激T细胞活化，并且可以预防肿瘤的生长；该抗肿瘤效应具有特异性和长期有效性。结论：TcdA可以诱导小鼠结肠癌CT26细胞发生凋亡，而且所产生的凋亡细胞能够刺激机体产生有效的抗肿瘤免疫反应。本课题的创新性在于，首次证实由TcdA诱导的肿瘤细胞凋亡具有免疫原性，表明了TcdA在肿瘤疫苗开发和肿瘤治疗方面的重要潜在价值。