基于Au@SiO2试纸条的黄曲霉毒素B1快速检测研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woailzm002
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黄曲霉毒素(AFT)是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉代谢产生的化学结构类似的二呋喃香豆素衍生化合物,其中黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性最强,分布最广,被世界卫生组织列为Ⅰ级致癌物质。因此亟需研究发展对黄曲霉毒素有高灵敏度和高选择性的快速检测分析方法,从而达到对谷物、油料作物和产品中黄曲霉毒素的污染情况进行及时有效监控的目的。试纸条快速检测方法检测速度快、预处理简单、灵敏度高,具有很大的研究价值与市场价值。免疫试纸条生物传感器利用特异性的抗原或抗体作为生物识别元素固定在硝化纤维素膜上,以各种纳米材料作为标记物可达到肉眼观察的定性检测与简单仪器分析后的定量检测。本研究以胶体金-纳米二氧化硅颗粒(Au@SiO2)纳米复合材料和胶体金纳米材料作为显色标记物,构建免疫生物传感器试纸条,对几种不同的免疫试纸条分析性能进行比较研究,并应用于山茶籽油实际样品中AFB1含量的检测。基于纳米复合材料的免疫试纸条传感器不仅大大简化了预处理步骤,同时缩短了检测时间,而且操作简单,既可以用肉眼进行定性分析,又可以通过仪器进行定量分析,满足了现场快速检测的要求。本论文的主要研究内容包括:(1)研究并制备胶体金-二氧化硅颗粒(Au@SiO2)复合材料,构建基于纳米复合材料的免疫试纸条生物传感器。对试纸条生物传感器的工作条件进行了优化,包括Au@SiO2与抗体结合的最佳pH值、试纸条测试线AFBi-BSA的浓度、Au@SiO2浓度与抗体用量的比值结合垫上等Au@SiO2-Mab1复合物的用量。在最优的实验条件下(Au@SiO2与抗体结合的最佳pH值为6.0,Au@SiO2的最优浓度与抗体的最佳用量为0.2 μg/mL),进行试纸条分析性能的研究。结果表明,试纸条的响应信号强度与标准毒素样品浓度在0.001~5 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检测限为0.81 pg/mL。该试纸条在室温和4℃条件下保存一个月之后,对空白和目标毒素的响应信号变化不大,表现出良好的重现性和稳定性;该试纸条对其他非目标毒素(赭曲霉毒素、大田软海绵酸等)没有明显的响应信号,展现了良好的特异性。(2)研究并制备胶体金试纸条与胶体金信号放大试纸条。分别对两种不同的传感器的工作条件进行优化。同时研究了试纸条的分析性能,在最优的实验条件下,胶体金试纸条在毒素浓度为0.05~10 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检测限为0.019 ng/mL;重现性与特异性表现良好,但稳定性表现不佳。胶体金信号放大试纸条在毒素浓度为0.005~10 ng/mL的范围内有良好的线性关系,检测限为0.0046 ng/mL,重现性、特异性及稳定性表现良好。(3)比较三种试纸条的分析性能,并实现了对山茶籽油实际样品中黄曲霉毒素的高灵敏检测。通过比较三种试纸条的工作曲线、灵敏度、检测限、稳定性和重现性,发现Au@SiO2试纸条具有最佳的研究分析性能与最低的检测限。在山茶籽油实际样品的检测中,Au@SiO2试纸条响应信号的强度与复杂基质中的目标毒素浓度在0.001~5 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检测限为0.97pg/mL,实际样品的工作曲线与标准品的工作曲线类似,说明该试纸条在复杂基质环境下仍然对目标毒素保持良好的选择性。实际样品的检测结果与酶联免疫试剂盒、市售试纸条的检测结果相一致,说明免疫试纸条检测具有较高的准确性。
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