【摘 要】
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目的:研究高糖环境培养下大鼠肾小管上皮细胞和糖尿病大鼠肾脏的NLRP3炎症小体的表达及其相关炎性因子、纤维化因子的表达变化;运用NLRP3siRNA基因沉默技术及血管紧张素受体拮抗剂(ARB类药)干预糖尿病肾病大鼠和受高糖刺激后的大鼠肾小管上皮细胞,检测上述指标的表达变化,探讨NLRP3炎症小体在糖尿病肾脏疾病的潜在作用机制,探究厄贝沙坦是否能阻断NLRP3炎症小体
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目的:研究高糖环境培养下大鼠肾小管上皮细胞和糖尿病大鼠肾脏的NLRP3炎症小体的表达及其相关炎性因子、纤维化因子的表达变化;运用NLRP3siRNA基因沉默技术及血管紧张素受体拮抗剂(ARB类药)干预糖尿病肾病大鼠和受高糖刺激后的大鼠肾小管上皮细胞,检测上述指标的表达变化,探讨NLRP3炎症小体在糖尿病肾脏疾病的潜在作用机制,探究厄贝沙坦是否能阻断NLRP3炎症小体的作用;设计不同时间点,初步探讨高糖刺激的时间长度对NLRP3炎症小体及通路相关分子的表达变化。方法:使用脂质体转染NLRP3siRNA,荧光显微镜下观察NRK-52E细胞转染阳性率,荧光定量PCR验证转染效率。细胞实验部分:分5组多个时间点:低糖组、高糖组、高糖 空载组、高糖 NLRP3siRNA组、高糖 ARB组,采用Q-PCR法检测各时间点的NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达;WesternBlot检测各时间点的NLRP3、热休克蛋白47(HSP47)、核因子?B(NF-?B)P-P65、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenIV)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)的表达水平。动物实验部分:分5组多个时间点(4W、8W、12W):正常对照组、高糖模型组、高糖模型 空载组、高糖模型 NLRP3siRNA组、高糖模型 ARB组,肾组织学免疫组化观察NF-?BP-P65的变化,肾组织免疫荧光观察Vimentin、NLRP3的变化;采用Q-PCR法检测各时间点的糖尿病大鼠肾脏组织NF-?B、NLRP3、HSP47、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、CollagenIVmRNA的表达;WesternBlot检测各时间点的NLRP3、HSP47、ɑ-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)、Vimentin、p-P65蛋白的表达。结果:细胞实验:1、五组细胞干预处理48h后,与低糖组比较,高糖组及高糖 空载组NLRP3、VimentinmRNA的表达显著增加(P
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