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背景:肠易激综合征是临床上一种常见的消化系统功能障碍疾病,主要特征是腹痛以及排便习惯的改变,这也给患者带来了生活和工作上极大的不便,甚至引起抑郁、焦虑等情绪障碍的发生。IBS发病机制复杂,现代研究认为脑肠轴互动异常导致内脏高敏感状态以及肠动力异常是IBS发病的主要病机。在脑肠轴互动机制研究中,5-HT是重要的沟通递质,而生物体内95%的5-HT来自于肠嗜铬细胞的合成与释放,已有研究发现辣椒素激活结肠TRPV1,使5-HT释放增多,并且与CaMKⅡ的磷酸化以及色氨酸羟化酶1（Tryptophan Hydroxylase 1,TPH1）活化有关;同时现代临床研究以及动物实验证明了针灸能够有效降低结肠中TRPV1的表达,改善IBS内脏疼痛以及排便习惯等症状,综合以往本课题组研究成果提出假说:结肠组织TRPV1调节CaMKⅡ信号介导电针缓解IBS内脏高敏感。目的:初步验证结肠组织TRPV1调控CaMKⅡ信号通路介导电针足三里缓解IBS小鼠内脏痛分子生物学机制。方法:本研究以野生型C57BL/6小鼠和TRPV1-/-基因敲除C57BL/6小鼠为研究对象,通过三部分实验论证本文科学假说。实验一:将野生型C57BL/6小鼠分成四组,分别为0、3、7、28天组,采用0.1ml三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS）与38.5ml 30%乙醇混合配制成TNBS灌肠液,每只小鼠取0.1ml TNBS灌肠液进行灌肠;灌肠后对各组采用小鼠结肠宏观组织病理评分、结肠组织病理学观察、腹部撤回反射（AWR）评分评估模型制备方法。实验二:将野生型C57BL/6小鼠随机分成正常组、模型组和电针组。（1）正常组（NG）:0.1ml 0.9%生理盐水灌肠1次,28天后同电针组相同的固定方式固定15min,每日1次,连续7天;（2）模型组（MG）:0.1ml TNBS灌肠液灌肠1次,28天后同电针组相同的固定方式固定15min,每日1次,连续7天;（3）电针组（EA）:0.1ml TNBS灌肠液灌肠1次,28天后取双侧足三里穴,接韩氏电针仪,参数:连续波,2Hz,1m A,15min/次,每日一次,连续7天。采用AWR评分对实验干预后各组小鼠内脏疼痛评分;采用免疫荧光法（双标）在结肠组织中定位CaMKⅡ与肠嗜铬细胞特异性标志物TPH1;采用ELISA法检测各组结肠组织中5-HT含量;采用real-time PCR方法检测各组结肠组织中TRPV1、CaMKⅡ、TPH1 mRNA的相对表达量;采用Western Blot法观察各组结肠组织中的TRPV1、p CaMKⅡ、TPH1蛋白的表达。实验三:将TRPV1-/-基因敲除鼠随机分成空白组、空白+电针组、模型组、模型+电针组。（1）空白组（NG）:0.1ml 0.9%生理盐水灌肠1次,28天后同电针组相同的固定方式固定15min,每日1次,连续7天;（2）空白+电针组（NE）:0.1ml 0.9%生理盐水灌肠1次,28天后取双侧足三里穴,接韩氏电针仪,参数:2Hz,1m A,15min/次,每日一次,连续7天;（3）模型组（MG）:0.1ml TNBS灌肠液灌肠1次,28天后同电针组相同的固定方式固定15min,每日1次,连续7天;（4）模型+电针组（EA）:0.1ml TNBS灌肠液灌肠1次,28天后取双侧足三里穴,接韩氏电针仪,参数波形:连续波,2Hz,1m A,15min/次,每日一次,连续7天;采用ELISA法检测各组结肠组织中5-HT含量;采用real-time PCR法检测各组结肠组织中TRPV1、CaMKⅡ、TPH1 mRNA的表达;采用Western Blot法检测各组结肠组织中的TRPV1、CaMKⅡ、TPH1蛋白的表达。结果:实验一:1)AWR评分结果:3天、7天、28天组在30、45、60mm Hg压力等级下AWR评分明显高于0天组（P<0.05）,3、7、28天组在各压力等级间AWR评分无显著差异。2)宏观病理炎症评分结果:3天、7天组炎症评分明显高于0天、28天组（P<0.05）;0天和28天组炎症评分无显著差异。3)HE染色观察组织病理学结果:0天组结肠组织粘膜充血水肿,粘膜上皮局部破损脱落,腺体排列紊乱,大小不一,少量炎细胞浸润腺体周围;3天组部分粘膜出血坏死,溃疡深达粘膜全层,炎症波及粘膜下层和肌层,粘膜下层充血水肿,炎症细胞浸润。7天组粘膜上皮增生修复,部分存在修复性溃疡,腺体周围少量炎细胞浸润,粘膜及粘膜下层轻度充血水肿;28天组中,结肠组织粘膜完整,腺体排列整齐,没有明显炎细胞浸润。实验二:1)AWR评分结果:模型组在30、45、60mm Hg压力等级评分显著高于正常组（P<0.05）,电针组在45、60mm Hg压力等级显著低于模型组（P<0.05）2)免疫荧光（双标）结果显示:各组间TPH1与CaMKⅡ在结肠组织上皮细胞处高度共表达。3)Western Blot结果显示:与正常组相比,模型组结肠组织TRPV1、p CaMKⅡ、TPH1蛋白表达量显著增加（P<0.01,P<0.05,P<0.01）;与模型组相比,电针组结肠组织TRPV1、TPH1蛋白表达量显著降低（P<0.05,P<0.01）,p CaMKⅡ蛋白表达量差异不具有统计学意义。4)Real-time PCR结果显示:与正常组相比,模型组结肠组织TRPV1、TPH1mRNA表达量显著增加（P<0.01,P<0.05）;与模型组相比,电针组结肠组织中TRPV1 mRNA表达量明显降低（P<0.01）,TPH1 mRNA表达量差异不具有统计学意义;三组间,CaMKⅡmRNA表达无统计学差异。5)ELISA结果显示:与正常组相比,模型组结肠组织5-HT含量显著增加（P<0.05）;与模型组相比,电针组结肠组织5-HT含量差异不具有统计学意义。实验三1)AWR结果显示:造模组小鼠在30mm Hg、45mm Hg、60mm Hg的AWR评分数据比正常组高,差异具有统计学意义（P<0.05）。2)Western Blot结果显示:各组间CaMKⅡ、TPH1蛋白表达无统计学差异。3)Real-time PCR结果显示:与空白组相比,空白+电针组、模型组三组间CaMKⅡ、TPH1 mRNA表达无统计学差异;与模型组相比,模型+电针组结肠组织CaMKⅡ、TPH1 mRNA表达无统计学差异。4)ELISA结果显示:各组间结肠组织5-HT含量差异不具有统计学意义。结论:1.电针足三里能够有效缓解TNBS诱导的IBS小鼠内脏痛敏;2.TRPV1可能通过介导CaMKⅡ的磷酸化以及调控TPH1的活性,进而影响5-HT的合成与释放,参与了IBS内脏高敏感的形成。3.电针可能通过TRPV1调节IBS内脏痛敏小鼠结肠组织TPH1的表达。