微卫星标记技术鉴别动物源性成份的应用研究

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商品中动物源性成份的掺假、冒充、瞒报等关系食品安全事件屡禁不止,损害着消费者的权益,影响着市场秩序。疯牛病的爆发,令人们开始重新思考饲料中添加动物源性成份的可行性。因此,商品中动物源性成份的鉴别显得越来越重要。现有的动物源性的检测方法,因操作流程复杂、技术落后等,已不能满足市场发展的需要。随着分子生物学技术的发展,微卫星DNA已被深入了解,微卫星DNA遵循孟德尔遗传定律,可以稳定遗传,被广泛应用于群体遗传研究,但是关于用微卫星标记技术鉴别肉品的研究还未见报道。运用微卫星标记技术建立一种快速、有效的动物源性成份的检测方法,确定动物成份的物种,能帮助质检人员提高工作效率降低成本,快速的控制动物源性商品的随意流通,扩大食品安全控制范围,满足市场发展的检测需要。本试验运用微卫星标记技术鉴别商品中常见的动物源性成份。采集市场上常见的猪、牛、山羊、绵羊、鸡、鸭、鹅为试验对象,建立组织DNA的快速提取方法,从Genebank中初选出牛、绵羊、鸭、鹅四种动物的微卫星标记,通过微卫星标记的侧翼序列设计引物,然后进行PCR-凝胶电泳,筛选出每种动物具有种内通用、种间特异性的微卫星标记用以鉴别。本实验室前期试验筛选出的猪、山羊、鸡的特异性微卫星标记,对新增绵羊和鹅源性样品进行检测,扩大此三种动物微卫星标记的检测范围。对市售动物性制品进行了成份的检测验证实际可应用性。试验结果表明:在猪、牛、山羊、绵羊、鸡、鸭、鹅的动物源性成份中鉴定猪源性成份采用猪的微卫星标记EF172428,扩增的目的片段为600bp;鉴定牛源性成份首先采用牛的微卫星位点AB271461,扩增的目的片段327bp,然后采用微卫星标记MCM164和AF245170,无扩增条带出现;鉴定山羊源性成份采用山羊的微卫星标记AF245170,扩增的目的片段为679bp;鉴定绵羊源性成份采用绵羊的微卫星位点MCM164,扩增的目的片段为297bp;鉴定鸡源性成份采用鸡的微卫星标记MCW174,扩增的目的片段为261bp;鉴定鸭源性成份采用鸭的微卫星标记AMU70,扩增的目的片段为252bp,然后采用微卫星标记EU833383,无扩增条带出现;鉴定鹅源性成份采用鹅的微卫星标记EU833383,扩增的目的片段为479bp。对市售鸭熟食类商品用鸭的微卫星标记AMU70检测,牛肉干类商品用牛的微卫星标记AB271461检测,结果都扩增出了目的条带,说明原料经过加工后,未影响微卫星方法进行动物源性成份的检测和鉴定。用微卫星标记技术鉴别动物源性成份的方法,具有较高的特异性、较好的重复性,且操作简便、快捷,适合大批样品的检验,值得推广应用。
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