穗花杉双黄酮通过调节CIP2A促进非小细胞肺癌凋亡

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背景:非小细胞肺癌(non-small cell Lung cancer,NSCLC)是最常见的人类恶性肿瘤之一。NSCLC的发病率和死亡率均居全球恶性肿瘤前列,虽然随着手术方式的不断改进、手术器械的不断升级,但是除了部分早期的NSCLC经过手术能达到治愈外,术后复发或转移依然不可避免,因此NSCLC单纯手术所带来的远期生存率并未得到明显的提升,而随着药物的治疗包括化疗药物、靶向药物、免疫抑制剂及中医药等方面的不断研究和进步,NSCLC的治疗效果较前有所提高,由此可见药物治疗在NSCLC的治疗中起到越来越重要的作用。中医药能改善患者症状,减轻放化疗的毒副作用,为NSCLC患者的治疗开辟了一个新方向,而且随着中医药提炼技术的进步,很多中医药中的成分被证实具有明显的抗肿瘤作用。穗花杉双黄酮(Amentoflavone,AF)是从卷柏(Selaginella tamariscina Spring)中分离的生物类黄酮化合物之一,是一种重要的中药成分。而且AF已经被证实在黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症中具有一定的抗肿瘤活性作用,并且能增加化疗药物的敏感性,但在NSCLC中却少见报道,此外对AF的抗肿瘤机制尚未完全明确,因此AF对于NSCLC细胞是否也具有抗肿瘤效果及其作用机制尚需进一步证实。目的:研究旨在探讨AF对NSCLC的影响及其作用机制。方法:采用克隆平板实验检测AF对NSCLC细胞活力的影响;采用Hoechst染色及流式细胞术检测AF对NSCLC细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Western blot检测AF对NSCLC细胞凋亡相关基因表达的影响。同时建立异种移植小鼠模型进一步检测AF在体内对NSCLC细胞的影响。采用i TAQ、PCR及Western blot技术检测AF与蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatae 2A,CIP2A)表达之间的相互作用。结果:克隆平板实验结果显示AF能够抑制NSCLC细胞的活力,而且呈剂量依赖性;AF通过下调细胞周期蛋白D1、CDK4和CDK6来促使NSCLC周期停滞Hoechst染色和流式细胞术证实了AF促进NSCLC细胞的凋亡;AF促进了NSCLC细胞的caspase-3的活化、Bax/Bcl-2比值的上调;在移植小鼠模型中AF依然对NSCLC细胞有促凋亡作用且与剂量相关;AF能明显下调CIP2A的表达,具有剂量依赖性,同时能增强PP2A的活性,而CIP2A敲低增强了AF的抗生长和促凋亡能力,CIP2A的过度表达却减弱了AF的抗生长和促凋亡能力。结论:我们的研究表明AF可促进NSCLC细胞的凋亡,并且AF可能通过靶基因CIP2A在NSCLC中起到抗癌作用。
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