论文部分内容阅读
目的:本研究应用高通量测序技术分析环状RNA在急性脑梗死患者中表达谱的差异及临床意义,以期为脑梗死诊断及治疗提供新的依据和思路。方法:收集20例发病7天内的急性脑梗死患者作为病例组（性别比例为11:）,就诊时间为2017年7月至2017年9月之间,就诊地点为吉林大学中日联谊医院神经内科,入选的患者均诊断明确,符合入组标准,另外按相同男女比例选取20例体检正常患者,作为对照组,分别收集患者血浆。利用高通量测序技术,对急性脑梗死患者血浆中差异性表达的circRNAs进行筛选,通过绘制火山图及聚类图直观展示差异circRNAs的情况,并利用相互作用基因分析软件,预测可能与明显上调、下调的circRNAs相互作用的相对应的miRNAs分子,并通过基因生物信息学对差异的circRNAs进行功能分析,探讨急性脑梗死患者血浆中circRNAs的潜在作用,以寻找可能的标志物。利用实时荧光定量PCR（Real-Time Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）技术对筛选出的差异表达的部分circRNA分子进行一代验证。结果:1.在本次送检的急性脑梗死患者血浆中,共检测到3764个差异表达的circRNAs,聚类分析图结果提示实验组与对照组之间存在着明显差异,其中上调表达的有771个,下调表达的有2993个,在差异表达的环状RNA中有18个是显著差异表达的,其中有3个表达上调,15个表达下调。2.基因本体论（GO）分析显示在脑梗死患者组中共得到130项条目（P<0.05）。其中生物学途径（BP）条目上调表达的circRNAs涉及24项,下调表达的涉及40项;细胞组分（CC）条目上调表达的circRNAs涉及27项,下调表达的涉及了24项;分子功能（MF）条目上调表达的circRNAs涉及9项,下调表达的涉及了6项。京都基因与基因组百科全书（KEGG）的通路分析结果显示下调表达的circRNAs的来源基因有1条富集的名为同源重组的信号通路,而上调表达的circRNAs的来源基因目前没有发现富集的信号通路。在circRNAs与miRNAs的预测结果中,差异的3764个circRNAs预测结合5778个miRNAs,结果中列出了前五位显著差异表达的circRNAs预测结合的miRNAs。3.选出6种下调的circRNA（hsacirc0001189、hsacirc0126525、hsacirc0001380、hsacirc0001558、hsacirc0001355、hsacirc0001445）设计引物,经RT-qPCR技术验证,与测序结果的差异趋势一致。结论:1.急性脑梗死患者circRNAs的表达谱已发生变化,存在大量表达上调或者下调的circRNAs。2.差异表达circRNAs的GO分析、KEGG通路分析、miRNAs预测总体上提示了circRNAs在脑梗死患者中发挥着重要的作用,环状RNA或许可以成为脑梗死诊治及预后判断的新靶点。3.利用RT-qPCR技术对其中6个circRNAs进行验证,该结果与基因测序结果一致,为进一步研究脑梗死提供了线索。