目的本文拟研究凋亡肿瘤细胞释放物质对肿瘤生长、转移以及对肿瘤微环境塑造等方面的影响及其分子机制,从一种全新的角度认识肿瘤的发生发展过程,希望从中寻找肿瘤治疗的新途径。方法(1)以B16黑色素瘤细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠,建立实验性小鼠肺部黑色素瘤转移模型。(2)以B16黑色素瘤细胞肌肉接种C57BL/6小鼠,建立实验性小鼠黑色素瘤模型。(3) UV照射的方法制备凋亡的B16黑色素瘤细胞。(4)采用尾静脉注射和肌肉注射的方法,观察凋亡B16细胞在体内对B16细胞肺转移和在肌肉中成瘤能力的影响。(5)以凋亡B16细胞尾静脉注射小鼠,流式细胞术分析小鼠骨髓和血液中细胞变化。(6) SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳初步分析肿瘤坏死释放出物质以及肿瘤组织中的各种成分。(7)免疫蛋白印迹法检测肿瘤释放物质中核酸成分对体外培养的B16细胞中HMGB1释放至胞外的影响。(8) RT-PCR研究经肿瘤释放物质中核酸成分处理后的免疫细胞对肿瘤迁移能力影响结果(1) UV照射可以使B16细胞凋亡。(2)凋亡的B16细胞可以促进B16细胞在肺部转移的能力。(3)凋亡的B16细胞可以促进B16细胞在腿部肌肉中成瘤的能力。(4)凋亡的B16细胞在小鼠体内可以改变骨髓和血液中Gr1+CD11b+细胞的比例。(5)在实体肿瘤周边部分的组织间液以及肿瘤坏死释放出来的物质中存在高浓度的蛋白质和RNA。(6)肿瘤RNA促进B16细胞释放HMGB1。(7)肿瘤RNA刺激后的巨噬细胞对黑色素瘤细胞的转移和迁移能力起到促进作用。结论凋亡的肿瘤细胞可以促进肿瘤的增殖和转移,并改变骨髓和血液中Gr1+CD11b+细胞的比例,肿瘤坏死释放出的各种物质尤其是RNA物质在这种促瘤效应中起重要的作用。