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胃癌的发生是一个多步骤的过程,涉及原癌基因、抑癌基因的突变及表观遗传学的改变。研究表明长链非编码RNA(lncRNA)在调控细胞分化、细胞增殖、细胞侵袭转移等生物学功能中起着重要的作用。许多lncRNA在胃癌中的表达出现异常,参与胃癌的发生发展过程。但目前关于胃癌的lncRNA尚不完善,因此,筛选更多胃癌相关的lncRNA分子,研究它们的生物学功能和分子机制,对于了解和阐明胃癌的发生发展具有重要作用。本文第一部分研究了 lncRNA HAGLROS在胃癌中的表达及与患者临床病理特征的相关性,其对胃癌细胞生物学功能的影响,上游转录因子及下游调控通路。第二部分研究了 lncRNA HOXC-AS1在胃癌组织及细胞中的表达水平及对胃癌细胞增殖,迁移能力的影响,及HOXC-AS1异常表达的分子机制。第三部分研究了LINC00355在胃癌中的表达水平及调控胃癌细胞增殖迁移的功能。以上研究提示lncRNA参与胃癌发生发展,介导复杂的RNA调控网络,为进一步研究分子机制和信号转导通路提供了一定的思路。第一部分 STAT3调控长链非编码RNA HAGLROS促进胃癌细胞增殖迁移及其机制的研究目的:研究HAGLROS在胃癌组织及细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖,迁移,凋亡功能的影响及分子机制和调控通路。方法:定量PCR检测HAGLROS在胃癌组织和细胞中的表达,并分析其与患者临床病理特征的相关性。MTT,克隆形成,流式细胞技术,裸鼠皮下成瘤实验检测HAGLROS对细胞增殖,凋亡的影响;划痕实验检测HAGLROS对细胞迁移的影响。CHIP和荧光素酶报告基因方法检测STAT3对HAGLROS的调控。核质分离实验确定 HAGLROS 在细胞中的定位。RIP,RNA-seq,Western blot 方法研究 HAGLROS对下游靶基因的调控。结果:HAGLROS在胃癌组织及细胞中表达上调,且胃癌细胞中转录因子STAT3促进HAGLROS的转录表达。胃癌细胞中敲低HAGLROS抑制细胞增殖、转移、成瘤能力,并诱导细胞凋亡;上调HAGLROS的表达则能促进细胞的增殖和转移能力。核质分离实验显示HAGLROS主要分布于细胞质。RNA-seq和Western blot结果显示mTOR可能是HAGLROS的下游靶基因。结论:综上所述,本研究提示在胃癌中STAT3促进lncRNA HAGLROS的转录,HAGLROS可能通过mTOR通路参与胃癌的发生发展,增殖转移的功能,可能作为胃癌病人预后差的分子标记物。第二部分 SP1调控长链非编码RNA HOXC-AS1促进胃癌细胞增殖迁移及其机制的研究目的:研究HOXC-AS1在胃癌组织及细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖,迁移,成瘤能力功能的影响及分子机制的初步研究。方法:定量PCR检测HOXC-AS1在胃癌组织和细胞中的表达。MTT,克隆形成,划痕实验,裸鼠皮下成瘤实验检测HOXC-AS1对细胞增殖,迁移,成瘤能力的影响。CHIP和荧光素酶报告基因方法检测SP1对HOXC-AS1的调控。核质分离实验确定HOXC-AS1在细胞中的定位。RIP实验研究HOXC-AS1对PRC2复合物的绑定。结果:HOXC-AS1在胃癌组织及细胞中表达上调,且胃癌细胞中转录因子SP1促进HOXC-AS1的转录表达。胃癌细胞中敲低HOXC-AS1抑制细胞增殖、转移、成瘤能力;上调HOXC-AS1则能促进细胞的增殖和转移能力。核质分离实验显示HOXC-AS1主要分布于细胞核。RIP实验表明HOXC-AS1可能通过绑定PRC2复合物调控下游靶基因。结论:综上所述,本研究提示在胃癌中SP1促进lncRNA HOXC-AS1的转录,HOXC-AS1可能通过绑定PRC2复合物沉默下游靶基因促进胃癌细胞的增殖转移。第三部分 长链非编码RNA LINC00355促进胃癌细胞侵袭转移及其机制的初步研究目的:研究LINC00355在胃癌组织及细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖,迁移,成瘤能力的影响及其下游机制的初探。方法:定量PCR检测LINC00355在胃癌组织和细胞中的表达。MTT,克隆形成,流式细胞技术,裸鼠皮下成瘤实验检测LINC00355对胃癌细胞增殖,凋亡,成瘤能力的影响。划痕实验,tanswell迁移实验检测LINC00355对胃癌细胞迁移能力的影响。核质分离实验确定LINC00355在细胞中的定位。RIP实验研究LINC00355与PRC2复合物的绑定。结果:LINC00355在胃癌组织及细胞中表达上调,胃癌细胞中敲低LINC00355抑制细胞增殖、转移、成瘤能力,并使细胞周期阻滞在G1期;上调LINC00355则能促进细胞的增殖和转移能力。核质分离实验显示LINC00355主要分布于细胞核。RIP实验表明LINC00355可能通过绑定PRC2复合物调控下游靶基因。定量PCR检测干扰LINC00355后EMT相关分子标记物发生相应变化。结论:综上所述,LINC00355促进胃癌增殖转移,可能是通过绑定PRC2复合物沉默下游靶基因发挥作用的,并能促进EMT的发生。