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目的:观察GCNF基因在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织以及体外培养宫颈癌细胞系(HeLa细胞)中的表达。构建人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体,研究GCNF基因重组质粒表达产物对体外培养宫颈癌细胞增殖、凋亡、黏附和侵袭力的影响。方法: (1)收集我校一附院病理科正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌(鳞癌)组织蜡块,并体外培养HeLa细胞,用免疫组织化学SP法观察GCNF基因在上述组织、细胞中的表达。(2)采用PCR的方法从pMD18-T-GCNF载体中扩增全长GCNF cDNA,酶切扩增产物及pcDNA3.1(-)载体质粒,酶切产物电泳回收后进行定向连接,构建pcDNA3.1-GCNF重组质粒,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,进行菌落PCR鉴定。扩增后提取重组质粒DNA进行PCR鉴定并制成甘油菌送往公司测序；(3)脂质体介导法瞬时转染重组质粒至宫颈癌HeLa细胞,RT-PCR以及间接免疫荧光鉴定转染结果；(4)倒置显微镜观察转染前后细胞形态的变化；MTT法检测转染前后细胞增殖的变化；Annexin V-PI双染流式细胞术分析转染前后细胞凋亡情况；基质黏附实验观察转染前后细胞黏附情况；Transwell侵袭实验检测转染前后细胞的侵袭能力。结果: 1.正常宫颈GCNF呈强阳性表达；CINⅠ中GCNF呈阳性表达；CINⅡ中只有个别细胞表达GCNF；CINⅢ中GCNF不表达;宫颈癌组织中GCNF不表达；HeLa细胞中GCNF不表达；2.PCR凝胶电泳在1450bp附近得到目的条带,经双酶切后与载体质粒连接得到pcDNA3.1-GCNF重组质粒,转化到大肠杆菌并经菌落PCR筛选得到单克隆菌株,抽提质粒DNA并经质粒PCR鉴定后测序,与基因库中登录的GCNF序列比较,符合率99.99%；3.阳性重组质粒脂质体法转染HeLa细胞,RT-PCR凝胶电泳显示转染目的基因后在200bp附近可见一条明亮的目的条带,其灰度比值(98.82±0.79)%明显高于未转染组和转染空质粒组(9.67±0.29,10.29±0.59)%,差异有统计学意义(P<0.05)；间接免疫荧光结果显示,转染目的基因后,大部分HeLa细胞的GCNF呈阳性表达,转染空质粒和未转染组HeLa细胞无GCNF表达；4.转染后细胞形态无明显变化；MTT结果显示,转染目的基因后HeLa细胞光吸收值最大(0.239±0.011),高于未转染组和转染空质粒组(0.203±0.009,0.196±0.016)(P<0.05)；流式细胞仪检测凋亡细胞,显示转染目的基因后细胞凋亡率最低为11.46%(P<0.05),空质粒和未转染组的凋亡率分别为16.5%和15.34%；同样的干预条件用基质黏附实验检测细胞迁移率,和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,发现各小组之间没有明显差异。结论:(1)GCNF基因在正常宫颈组织中高表达可能与上皮细胞的正常分化有关；(2)首次观察到GCNF基因在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中表达由强变弱至宫颈浸润癌表达完全消失,提示GCNF基因可能未参与宫颈上皮细胞的异常分化或恶性分化；(3)GCNF基因在宫颈浸润癌以及体外培养HeLa细胞中不表达提示GCNF基因可能作为宫颈癌的一个早期诊断指标；(4)成功构建了pcDNA3.1-GCNF真核表达载体,并瞬时转染入宫颈癌HeLa细胞；(5)GCNF过表达可促进了体外培养的HeLa细胞的增殖,同时也可抑制其凋亡,而对HeLa细胞的黏附和侵袭没有影响。(6)本研究结果对宫颈癌早期诊断以及宫颈癌发病机制等提供参考。