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研究背景及目的：沙眼衣原体引起的感染性疾病在世界范围内，已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。黄芩苷作为一种天然的黄酮类化合物，对多种病原微生物都具有直接的杀灭作用，项目组前期工作已经证实黄芩苷可以抑制体内外模型中沙眼衣原体的生长，并能下调衣原体蛋白酶样活性因子CPAF的表达。CPAF是由Ct858基因编码，通过Ⅲ型分泌系统分泌至宿主胞浆的毒力蛋白。其蛋白水解酶活性作用于多种宿主靶细胞，从而在衣原体与宿主细胞的相互作用中发挥着重要作用。本项目拟在前期工作基础上，进一步深入研究黄芩苷对由CPAF裂解细胞内靶蛋白引发关联效应的影响。我们认为黄芩苷通过下调CPAF对靶蛋白的裂解水平，影响着细胞免疫逃逸、细胞骨架的溶解性和抗凋亡，干预Ct的持续性感染进程。藉此项研究，我们试图发现和建立一种干预Ct持续性感染进程的新模式。这种新模式不仅使我们可更深入了解Ct感染的致病机理和丰富Ct持续性感染的基本理论，而且具有重要的治疗学意义。本项目的具体研究目的如下：1.围绕黄芩苷对由CPAF裂解靶蛋白引发关联效应的影响，发现和建立一种干预Ct持续性感染进程的新模式。2.明确黄芩苷在干预Ct的体外感染过程中，CPAF所起的具体作用及其分子机制。研究方法：1） Ct的细胞培养及黄芩苷的体外干预：用HeLa229/PURL/McCoy细胞体外培养Ct，选取不同的时间点及不同浓度黄芩苷干预后（0.27Mm、0.54mM、1.08mM），免疫荧光IF检测衣原体包涵体数目及大小。2）对感染细胞免疫逃逸功能的影响：Western blot检测CPAF、RFX5及USF1蛋白表达水平；流式检测细胞表面MHCⅠ、CD1d表达。3）对感染细胞抗凋亡的影响：Hoechst33258染色荧光显微镜下检测细胞凋亡率；AnnexinV/PI双染流式检测感染后不同时间段凋亡率；流式检测活化的Caspase-3表达水平；Western blot检测唯BH3域前凋亡蛋白Bim、Bik、Puma的蛋白表达水平。4）对感染细胞骨架溶解性的影响：鬼笔环肽phalloidine标记F-actin，IF检测细胞骨架重排效应；Western blot检测CK8蛋白表达水平。5）体内研究对Ct感染率的影响：构建Ct经生殖道感染小鼠模型，体外接种HeLa细胞，通过IF检测感染率。实验结果：1）免疫荧光显示黄芩苷显著抑制衣原体体外生长，明显缩小包涵体形成的大小及数目，分别用0.27mM、0.54mM、1.08mM浓度的黄芩苷予以体外干预，结果显示随着药物浓度升高，其抑制作用越显著。2）黄芩苷下调衣原体CPAF表达，抑制感染细胞内RFX5、USF1裂解，并进而影响感染细胞表面MHCⅠ及CD1d下调。3）黄芩苷抑制感染宿主细胞唯BH3域前凋亡蛋白的降解，上调active-Caspase3的表达，有效抑制感染细胞的抗凋亡活性。4）黄芩苷抑制Ct感染导致的宿主细胞骨架重排及CK8降解。5）黄芩苷抑制Ct经生殖道感染。结论：1）黄芩苷显著抑制衣原体的体外生长，并呈药物剂量关系。2）黄芩苷阻碍衣原体感染引发的免疫逃逸效应。3）黄芩苷抑制衣原体的抗凋亡活性。4）黄芩苷抑制衣原体感染宿主细胞骨架重排现象。