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IGFs家族由两个同源多肽类生长因子(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)、两类受体(IGF-IR、IGF-ⅡR)和七种结合蛋白(IGFBP1-7)组成.IGFs的生物学功能主要是通过刺激有丝分裂,从而促进机体的生长发育.IGFs通过与特异性受体结合发挥其生物功能,IGF-IR是其主要介导者.采用RT-PCR半定量方法对斜带石斑鱼脑部各分区和其它组织部位,以及在胚胎发育和幼体发育过程中IGF-IR mRNA的表达分布情况进行初步研究,同时做southern blot验证结果的可信性.IGF-IR在七个脑分区的表达量远远大于其它组织部位的,表明IGF-IR在大脑细胞增殖、髓鞘形成和轴突的生长方面有重要作用.组织部位中视网膜的表达量最高,其次是性腺、肌肉和鳃,肝脏和胸腺只有少量表达,这些与前人研究的结果相一致.值得一提的是,在很多已经报道过的鱼类研究中,IGF-IR在心脏有较多量的表达,而该实验中心脏和头肾是用southern blot才能检测出来信号的.对斜带石斑鱼胚胎发育过程中的10个时期进行半定量RT-RCR,结果表明每个时期均有表达,IGF-IRmRNA在未受精卵已经开始表达,受精后表达量立即增大,在仔鱼出膜以前各时期均持续高水平的表达,囊胚期时稍有下降.仔鱼出膜前期IGF-IR mRNA表达量开始下降,出膜时降到最低.对斜带石斑鱼仔鱼出膜后1~50天的13个时期进行半定量RT-RCR,结果表明每个时期均有不同量的表达,IGF-IR mRNA在仔鱼孵化后的前3天表达量较低,随后开始大量增加,在变态期(第40~50天)前均有高水平的表达,第10~20天稍有降低.仔鱼变态前IGF-IR mRNA表达量开始逐渐下降,直到变态时期降至最低.IGF-IR的广泛分布,提示IGFs的功能除了通过内分泌途径实现,还有自分泌或旁分泌途径,同时结果也表明IGF-IR在鱼类胚胎和个体发育早期发挥着重要作用.通过亚克隆技术将IGF-IR-α亚基片段连接到融合表达载体Pet-15b上,构建了重组表达质粒Pet-15b-IGF-IR-α,然后将其转化到BL21中,用IPTG诱导重组质粒表达了与预期片段大小一致的IGF-IR-α亚基融合蛋白.经过在不同的表达条件下,如诱导温度、时间和诱导剂IPTG浓度对蛋白表达情况的研究,发现诱导温度对蛋白表达的影响最大,蛋白表达量随着诱导时间的延长而增加,IGF-IR-α融合蛋白在0.1mM~1.0mM范围之内终浓度IPTG的诱导下均能得到较好的表达.在菌液OD<,600>为0.5~0.6时,加入0.1mM~1.0mM终浓度的IPTG诱导6hr~8hr为Pet-15b-IGF-IR-α的最佳诱导培养条件.同时用Pet-15b载体上的His-Tag标签蛋白抗体对IGF-IR-α亚基融合蛋白进行Westernblot,实验结果初步证明IGF-IR-α亚基融合蛋白具有免疫活性.