盐酸阿米洛利对百草枯中毒致急性肺损伤保护作用的机制研究

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目的研究百草枯诱导急性肺损伤中毒机制中胞内钙离子的作用,并探讨钠氢交换体-1(NHE-1)、钠通道阻滞剂盐酸阿米洛利对百草枯中毒诱导的急性肺损伤的保护及治疗作用。方法体外培养A549细胞,用不同浓度百草枯进行不同时间的干预,MTT法检测半数成活率以筛选半数死亡时间和半数死亡浓度作为实验干预点,并以此干预点构建细胞百草枯中毒模型,根据不同药物处理分为3个实验组:空白对照组、百草枯损伤组和盐酸阿米洛利保护组。利用实时定量PCR技术分析各实验组NHE-1mRNA表达水平变化;用荧光染料Fluo-3/AM染色,利用激光扫描共聚焦显微镜的实时监测胞内钙离子的优势,记录给予百草枯刺激和盐酸阿米洛利保护时的胞内游离钙离子浓度变化。数据采用((X|-)±S)表示,应用SPSS16.0软件进行统计分析。结果实时定量PCR结果显示NHE-1mRNA表达水平在药物对照组明显比百草枯组和空白对照组低(P<0.05)。当给予百草枯刺激时,胞内游离钙离子浓度较静息状态显著升高(钙离子荧光强度:1802.55±144.15 Vs 1470.90±225.71,P<0.01),而追加盐酸阿米洛利后,钙离子相对浓度较百草枯刺激明显下降(钙离子荧光强度:471.86±232.83 Vs 1802.55±144.15, P<0.01);结论钠氢交换体-1在百草枯中毒诱导的钙超载中起着重要作用;盐酸阿米洛利可抑制百草枯诱导的胞内钙离子升高水平,对百草枯致肺损伤具有一定保护作用。
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