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目的： 1、构建Smurf1 shRNA真核表达载体。 2、分析沉默Smurf1对结肠癌细胞系增殖、迁移、侵袭和EMT转化的影响。 方法： 1.Smurf1 shRNA载体的构建用BamHⅠ和HindⅢ将pSilencer4.1质粒和Smurf1同时进行双酶切后，T4 DNA ligase连接;测序验证。 2 Smurf1 shRNA转染结肠癌细胞系将脂质体和干扰质粒同时转染入复苏好的结肠癌细胞中。 3.Smurf1 shRNA稳转细胞系的筛选确定筛选稳转细胞系的G418浓度，并筛选出Smurf1 shRNA稳转细胞系。 4.Western blot验证转染是否成功检测Smurf1蛋白表达，确定转染效果。 5.MTT分析shRNA对结肠癌细胞增殖的影响 MTT法检测结肠癌细胞增殖情况。 6.Smurf1 shRNA对结肠癌细胞迁移的影响划痕实验检测结肠癌细胞迁移情况。 7 Smurf1 shRNA对结肠癌细胞侵袭的影响Transwell实验检测结肠癌细胞侵袭情况。 8下调Smurf1对结肠癌细胞EMT转化的影响Western blot检测E-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表达水平降低反映结肠癌细胞EMT转化情况。 结果： 1、Smurf1 shRNA重组质粒构建成功。 2、与对照组相比，转染有干扰载体的结肠癌细胞系HCT116和SW480随着时间的增加细胞的增殖速率降低。 3、转染shRNA重组质粒的结肠癌细胞迁移能力下降。 4、Transwell实验证明转染干扰载体后，结肠癌细胞穿越滤膜的细胞数目降低。 5、结肠癌细胞中的Smurf1表达下调，增加了E-cadherin的表达水平，降低了Vimentin和Twist的表达水平。 结论： 1、成功的构建了Smurf1干扰载体，该载体能够抑制Smurf1的表达。 2、结肠癌细胞中Smurf1表达下降，抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。