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目的:Cullin3(CUL3)致病突变体Cullin3Δ9(缺失9号外显子,CUL3Δ9)可导致家族性高血钾型高血压(Familial hyperkalemic hypertension,FHHt)。最新研究发现CUL3Δ9类泛素化修饰(neddylation)程度较野生型CUL3明显增强,会导致其连接蛋白KLHL3被过度降解,使得底物WNK激酶累积。本研究将探讨CUL3致病突变体CUL3Δ9是否由于与COP9信号体(COP9signalosome,CSN)结合减弱而导致neddylation异常。方法:用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞株,采用脂质体转染技术,将构建好的FLAG-CUL3质粒和CUL3致病突变体FLAG-CUL3Δ9质粒转染HEK293细胞,以FLAG抗体与Dynabeads Protein G磁珠行免疫共沉淀技术,Western blotting观察CUL3或CUL3Δ9与CSN5的结合情况;在分别转染上述两种质粒后,用金属蛋白酶抑制剂1,10-菲咯啉(1,10-phenanthroline)处理转染的细胞,或者利用RNAi技术敲低CSN5,Western blotting观察CUL3和CUL3Δ9的neddylation的变化。结果:免疫共沉淀结果显示CUL3与CSN5有结合,而CUL3Δ9与CSN5结合减弱;以金属蛋白酶抑制剂1,10-菲罗啉抑制CSN5后,CUL3的neddylation程度增加(p<0.05)而CUL3致病突变体CUL3Δ9 neddylation无明显变化;转染CSN5 siRNA后,CUL3的neddylation程度增加(p<0.05)而CUL3致病突变体CUL3Δ9neddylation无明显变化。结论:CUL3致病突变体CUL3Δ9是由于与CSN结合减弱导致neddylation异常。