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冬虫夏草是指麦角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,含有多种活性成分,且具有多种药理学作用。本课题组前期对天然冬虫夏草的化学成分、多糖结构及其多糖对免疫调节和肠道健康作用进行了详细的研究,但是对冬虫夏草其他成分是否也能表现相应活性尚不清楚;在活性多糖提取过程中,是否也会产生相似活性的提取物也不得而知。基于此,本研究收集了冬虫夏草多糖提取过程中涉及的各个提取部分,测定其化学组成。通过建立环磷酰胺诱导小鼠肠道损伤模型,灌胃包括天然冬虫夏草原料在内的各个提取部分,评价其对小鼠肠道黏膜屏障以及黏膜免疫的作用效果,以此来探讨和比较冬虫夏草各个提取部分对小鼠肠道损伤的修复功能。主要结果如下:(1)采用乙醇和水从天然冬虫夏草里提取出7个不同部分,分别是醇提物(EE),醇提残渣(REE),水提残渣(RWE),水提物(WE),粗多糖(NCSP),醇溶物(WE-S),纯多糖(NCSP-50),测定了包括冬虫夏草原料在内各个提取部分的基本化学组成及含量。结果显示:残渣组(REE,RWE)的得率相对较高,而醇溶物EE和多糖组(NCSP,NCSP-50)得率较低。除水提残渣RWE未检测到糖含量以外,各个提取部分主要是以糖和蛋白质为主,占总干重的12.73%-85.73%,且WE-S的蛋白质含量在所有部分中最高。此外乙醇提取物类(EE,WE-S)的总酚和总黄酮类小分子成分含量高于其它提取部分,而WE、NCSP、NCSP-50的多糖类大分子含量则相对较高。另一方面,根据各个提取部分得率确定动物实验的灌胃剂量,建立环磷酰胺诱导的小鼠模型。结果表明,环磷酰胺可迅速降低小鼠体重,显著影响小鼠免疫器官状态,降低脾脏和血清中的细胞因子含量,而冬虫夏草各提取部分可在不同程度上调节环磷酰胺对机体造成的免疫抑制。(2)通过观察测定小鼠小肠组织结构和黏膜屏障相关指标的变化,研究冬虫夏草各个提取部分对环磷酰胺诱导小鼠肠道损伤的修复作用。结果显示,冬虫夏草不同提取部分能显著改善肠道损伤小鼠肠道黏膜的形态结构,增加绒毛长度,降低隐窝深度,提高小肠上皮细胞中杯状细胞的数量,且能够提高紧密连接蛋白的表达。提示天然虫草不同提取部分可能通过修复肠道黏膜屏障、恢复肠道完整性来缓解肠道损伤。(3)通过测定小鼠肠道黏膜免疫相关指标,研究冬虫夏草各提取部分对环磷酰胺诱导小鼠肠道损伤的修复机制。结果显示,冬虫夏草不同提取部分能显著增加IgA分泌细胞数量、sIgA含量和相关免疫细胞含量;调节Th1/Th2和Th17/Treg细胞分化的平衡、提高T细胞向不同亚群CD4+和CD8+分化;不同程度地增加小鼠粪便短链脂肪酸含量。从总体来看,冬虫夏草提取物的效果优于原料,这可能由于提取使活性成分能够有效富集。以上研究表明冬虫夏草具有显著的肠道免疫活性,从而发挥损伤修复效应。