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目的:创建智能环境控制系统(IntelligentControlledEnvironmentalSystem,ICES),有效调控环境湿度(RelativeHumidity,RH)、温度(Temperature,T)和气体流量(Airflow,AF),并应用ICES创建一个单纯环境因素诱导的小鼠干眼模型。
方法:创建智能环境控制系统,应用一种新型分子吸湿剂(分子筛),通过两阶梯除湿法降低实验环境的相对湿度(RH),并利用空调控制环境温度(T)、内置可调速风扇控制风速(WV),从而有效控制湿度、湿度和气体流量。将30只4-6周龄的雌性Balb/c小鼠饲养于ICES中,在特定实验环境下(RH15±3%,AF=2.1±0.2m/s,T:21-23℃)淆导模型,同时在正常环境(RH:60%-80%,noAF,T:21-23℃)中设置对照组。应用酚红棉线试验、角膜荧光素染色、组织病理切片、扫描电镜和免疫荧光等方法,于第3、7、14、28和42天分期观测泪液分泌量,角膜屏障功能,眼表上皮形态以及凋亡标志物表达的改变。应用免疫荧光法,于第42天,检测跟表上皮细胞凋亡标志物(activecaspase-3)表达的改变。
结果:智能环境控制系统可快速负反馈调控环境湿度至实验需求水平,可使温度、湿度和气体流量同时得到有效调控。实验组与对照缰小鼠在基点处各观测指标差异无统计学意义。实验组小鼠在ICES巾饲养3天和7天后,泪液分泌量较对照组无明显减少(P>0.05),而在14、28和42天泪液分泌量明显减少,各时间点均有统计学差异(P<0.05)。实验组小鼠在ICES中饲养3天和7天后,角膜荧光素染色程度较对照组无明显差异(P>0.05),在14、28和42天角膜荧光素染色程度明显加重,各时间点均有统计学差异(P<0.05)。实验组小鼠在ICES中饲养3大和7天后,角膜上皮形态无明显改变,在14、28和42天角膜上皮明显变薄且上皮细胞排列紊乱。打描电镜检查显示对照组小鼠角膜上皮细胞表面微皱襞和微绒毛分布均匀,细胞间呈紧密连接。在14、28和42天实验组小鼠角膜上皮表明脱落细胞增加,微皱襞和微绒毛大量丢失,表层细胞间连接呈缝隙改变,而在第3和第7天,无明显改变。和对照组小鼠相比,在14、28和42天实验组小鼠结膜上皮鳞状化生,杯:状细胞密度下降,上皮细胞层次增加且排列异常紊乱。存第42天,限表(结膜、角膜)上皮出现凋亡标志物(activecaspase-3)高表达。
结论:低湿、高气体流量的坏境会导致正常小鼠泪液分泌量减少,并出现与临床干眼的相似的眼表上皮病变以及凋亡标志物(activecaspase-3)的高表达。